載體攜帶小干擾RNA抑制人舌癌Tca8113細胞VEGF的表達以及腫瘤生長的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：了解載體攜帶的小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)對人舌癌細胞株(tongue squamous carcinoma cell line，Tca8113)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達的抑制作用以及對腫瘤細胞和移植瘤血管生成和生長的影響。 方法：采用兩對針對血管內(nèi)皮生長因子的siRNA真核表達載體(PU-VEGF-si

2、RNA1,PU-VEGF-siRNA2)，以空載體組做實驗對照組，經(jīng)脂質(zhì)體lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染Tca8113細胞，經(jīng)G418篩選后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株，未轉(zhuǎn)染組做空白對照組。采用MTT檢測轉(zhuǎn)染后Tca8113細胞的增殖，流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后Tca8113細胞的凋亡和細胞周期，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測轉(zhuǎn)染后VEGF mRNA表達情況；將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的各組細胞接種裸鼠，每組5只，接種后7天開始，每4天測量瘤體積，

3、繪制腫瘤生長曲線，比較各時間段腫瘤生長情況，接種后47天處死，比較瘤體體積和瘤重。應(yīng)用免疫組織化學方法檢測裸鼠腫瘤組織VEGF的表達并評價腫瘤微血管密度，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標記法(TUNEL)定量檢測裸鼠模型的腫瘤組織凋亡。 結(jié)果：與實驗對照組和空白對照組比較，轉(zhuǎn)染PU-VEGF-siRNA載體后Tca8113細胞的增殖減緩，凋亡率增加，VEGF mRNA表達明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。細胞周期結(jié)果顯示，實驗組

4、S期改變與對照組細胞S期改變差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。裸鼠體內(nèi)實驗表明，與實驗對照組和空白對照組相比較，2個實驗組腫瘤生長速度降低，裸鼠接種腫瘤生長緩慢，處死后測量到瘤體體積小、重量輕(P＜0.05)，而實驗對照組和空白對照組瘤體體積、瘤重均無明顯差異(P＞0.05)。實驗組VEGF表達和腫瘤微血管密度明顯低于對照組(P＜0.05)。實驗組可見大量凋亡細胞，對照組僅見少許凋亡細胞，實驗組凋亡指數(shù)與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜