稀土納米熒光探針-小干擾RNA靶向遞送系統(tǒng)的制備及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的影響.pdf

1、目前，癌癥已經(jīng)成為威脅人類健康和導(dǎo)致人類死亡最嚴(yán)重的疾病之一。傳統(tǒng)的腫瘤治療手段，如手術(shù)切除或者化學(xué)藥物治療等，治療效率低且副作用大，已不能滿足當(dāng)前癌癥患者的治療需求。基因治療是一種新型的腫瘤治療手段，它利用載體，將外源DNA轉(zhuǎn)入到體內(nèi)，進(jìn)行人工表達(dá)，以彌補(bǔ)內(nèi)源基因的缺陷，其具有許多傳統(tǒng)治療方法沒有的優(yōu)點(diǎn)。但是，目前臨床常見的基因治療載體多為病毒載體，具有免疫原性、潛在毒性等未知風(fēng)險(xiǎn)。將治療基因安全的遞送到腫瘤細(xì)胞內(nèi)，使其有效表達(dá)是目前

2、研究的主要瓶頸。
　　熒光探針作為一種目前研究發(fā)展火熱的檢測技術(shù)，具有一些特有的優(yōu)勢，如靈敏度高、選擇性好、具有良好的細(xì)胞膜滲透性等。本課題將熒光探針通過人工修飾，構(gòu)建一種新型靶向遞送系統(tǒng)，用以裝載治療基因，可以使其發(fā)揮其本身的檢測能力的同時(shí)，還能達(dá)到遞送藥物治療的目的。
　　本研究基于熒光探針的結(jié)構(gòu)，構(gòu)建了一種稀土上轉(zhuǎn)換發(fā)光的納米熒光探針，用以靶向遞送小干擾RNA，并考察了稀土納米顆粒的最佳使用條件，顆粒與RNA的最佳N/

3、P比，最后用PCR與Western Blot檢測該探針遞送RNA的遞送效率，與蛋白質(zhì)表達(dá)效果。結(jié)果表明，稀土上轉(zhuǎn)換納米顆粒NaYF4:Yb3+,Tm3+在反應(yīng)pH為4時(shí)，形貌、粒徑和分散度為最好，此時(shí)粒徑均勻在30 nm~50 nm。在980 nm激發(fā)光下，顆粒發(fā)光出489 nm的青光，用SiO2修飾后，還能進(jìn)一步提高顆粒的發(fā)光強(qiáng)度。在接枝PEI和HA后，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明：最終得到的納米熒光探針在UCNPs/PEI為1:10，且UCNP

4、s/PEI顆粒的細(xì)胞濃度為10μg/ml時(shí)，探針對(duì)細(xì)胞的毒性小且PEI的含量較高。在N/P為6:1時(shí)，UCNPs/PEI與基因載體完全復(fù)合。用該遞送系統(tǒng)遞送miRNA-26a載體，轉(zhuǎn)染LOVO細(xì)胞，用熒光倒置顯微鏡觀察miRNA-26a載體中的GFP表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)：細(xì)胞內(nèi)有較高的GFP熒光，說明miRNA-26a載體進(jìn)入細(xì)胞且GFP基因有效表達(dá)。用qRT-PCR對(duì)miRNA-26a的基因表達(dá)進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染48 h時(shí)，miR-26a