蘇木、川芎對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠模型原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤的影響.pdf

1、立題依據(jù):
　　近年來(lái)，盡管對(duì)于肺癌的預(yù)防、診斷和治療取得了一定的進(jìn)步，但其發(fā)病率與死亡率仍比其他惡性腫瘤要高，腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移一直是影響腫瘤預(yù)后的主要原因。根據(jù)達(dá)爾文進(jìn)化理論，腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell，CSCs)是一類較普通腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)自我更新能力的細(xì)胞。針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的治療策略，將為腫瘤的治療提供新的思路。CSCs被認(rèn)為是具有異質(zhì)性和無(wú)限增殖能力的一小部分細(xì)胞亞群，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移中都表現(xiàn)

2、出來(lái)較普通腫瘤細(xì)胞更強(qiáng)的惡性生物學(xué)行為。根據(jù)腫瘤患者的臨床表現(xiàn)、血液流變學(xué)異常等現(xiàn)象，均可以說(shuō)明腫瘤患者存在血瘀證，并與腫瘤患者的預(yù)后較差相關(guān)。另外手術(shù)也會(huì)損傷患者的血管內(nèi)皮細(xì)胞，激活凝血機(jī)制，使血液處于高凝狀態(tài)。因此在手術(shù)前后使用活血藥干預(yù)血液的高凝狀態(tài)，對(duì)于改善干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠的治療效果有一定的意義。前期研究中已經(jīng)證實(shí)蘇木、川芎等活血藥可能通過(guò)影響CD44V6、p-選擇素、CD29、E-cadherin、HIF-1α的表達(dá)在一定

3、程度上抑制肺癌的轉(zhuǎn)移行為。另外，蘇木含藥血清及蘇木水煎劑在體外實(shí)驗(yàn)中均可以對(duì)肺癌細(xì)胞的增殖產(chǎn)生一定的抑制作用，這與其影響細(xì)胞的周期、侵襲及黏附能力有關(guān)。蘇木、川芎聯(lián)合順鉑可對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠腫瘤組織的HIF-1α產(chǎn)生抑制作用，并從mRNA水平上抑制肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞的E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail表達(dá)，抑制EMT上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。本課題是前期課題的延續(xù)與擴(kuò)展，結(jié)合腫瘤干細(xì)胞

4、理論，觀察蘇木、川芎及順鉑對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠手術(shù)模型的生長(zhǎng)、復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)行為的影響，以期為臨床上合理選擇活血藥及其應(yīng)用時(shí)機(jī)，從肺癌干細(xì)胞的角度探索活血藥的可能作用機(jī)制及作用靶點(diǎn)，為充實(shí)肺癌血瘀證的治療理論及臨床上合理應(yīng)用活血藥提供借鑒。
　　研究目的:
　　1、研究活血藥蘇木與川芎對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠模型原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤的抑制作用;
　　2、從HIF-1α及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子的角度，研究活血藥抑制肺癌

5、干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠模型原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤的作用機(jī)制。
　　研究方法:
　　1、模型制備:采用無(wú)血清培養(yǎng)法分選PG-BE1細(xì)胞系中的干細(xì)胞樣細(xì)胞亞群;將干細(xì)胞樣細(xì)胞亞群接種于老鼠下肢腳墊。采用藥物對(duì)小鼠進(jìn)行干預(yù)，第21天截肢并剝?nèi)⌒∈笤l(fā)瘤組織。繼續(xù)觀察小鼠的復(fù)發(fā)情況，并用藥物進(jìn)行干預(yù)，于第40天時(shí)獲取復(fù)發(fā)瘤組織;
　　2、分組情況:對(duì)原發(fā)瘤組織進(jìn)行分組。依據(jù)干預(yù)手段的不同，將肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠模型原發(fā)瘤組織分為空白

6、組、中藥組、中藥加順鉑組、順鉑組4組，分別用生理鹽水、中藥水煎液、中藥水煎液加順鉑、順鉑對(duì)小鼠進(jìn)行干預(yù)，第21天取原發(fā)瘤組織。對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織進(jìn)行分組。依據(jù)手術(shù)前后干預(yù)手段的不同，將肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠分為空白組、中藥術(shù)前組、中藥術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、中藥加順鉑術(shù)前組、中藥加順鉑術(shù)后組7組。分別用生理鹽水、術(shù)前用中藥水煎液、術(shù)后用中藥水煎液、術(shù)前用順鉑、術(shù)后用順鉑、術(shù)前用中藥水煎液聯(lián)合順鉑、術(shù)后用中藥水煎液聯(lián)合順鉑對(duì)小鼠進(jìn)行干

7、預(yù)，第40天取復(fù)發(fā)瘤組織進(jìn)行檢測(cè);
　　3、活血藥抑瘤作用研究:(1)采用觀察小鼠成瘤時(shí)間法，以觀察蘇木、川芎對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠成瘤時(shí)間的影響。(2)采用稱量法，觀察蘇木、川芎對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠術(shù)后體重的影響。(3)觀察小鼠腫瘤復(fù)發(fā)模型情況，計(jì)算蘇木、川芎對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠腫瘤復(fù)發(fā)率及復(fù)發(fā)率抑制率。(4)采用稱重法，對(duì)原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織進(jìn)行稱重，觀察蘇木、川芎對(duì)原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織瘤重、抑瘤率、復(fù)發(fā)瘤

8、重及復(fù)發(fā)瘤重抑制率的影響;
　　4、活血藥抑瘤機(jī)制研究方法:(1)采用Western Blot法及免疫組化法檢測(cè)原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1α蛋白的表達(dá)，觀察蘇木、川芎對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1α蛋白表達(dá)的影響。(2)采用Western Blot法、免疫組化法及免疫熒光法檢測(cè)原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織EMT相關(guān)分子E-cadherin、CD44S、CD44V6、β1整合素的表達(dá)，觀察蘇木、川芎對(duì)肺癌

9、干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠原發(fā)瘤組織和復(fù)發(fā)瘤組織EMT相關(guān)分子的影響。
　　研究結(jié)果:
　　一、活血藥蘇木、川芎提高了化療藥順鉑的抑瘤率
　　1、蘇木可提高順鉑對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠模型原發(fā)腫瘤的抑瘤率:肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠各組體重的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，術(shù)后各組間體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。原發(fā)瘤重方面，蘇木聯(lián)合順鉑組較空白組、蘇木組和順鉑組減少(P＜0.05)。順鉑組原發(fā)瘤重較空白組、蘇木組降低（P＜0.05）。蘇

10、木組較空白組原發(fā)瘤重相當(dāng)（P＞0.05）。在原發(fā)瘤抑制率方面，蘇木組抑瘤率為8.93％，順鉑組抑瘤率為35.27％，蘇木加順鉑組抑瘤率為48.76％。
　　2、蘇木可提高順鉑對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠模型復(fù)發(fā)腫瘤的抑瘤率:與空白組、蘇木術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組比較，蘇木加順鉑術(shù)前組、蘇木加順鉑術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重明顯下降（P＜0.05），蘇木加順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組復(fù)發(fā)瘤重下降明顯(P＜0.05);與空白組、蘇木

11、術(shù)前組、蘇木術(shù)后組比較，順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重明顯下降(P＜0.05)，順鉑術(shù)后組較順鉑術(shù)前組復(fù)發(fā)瘤重相當(dāng)（P＞0.05）。與空白組比較，蘇木術(shù)前組復(fù)發(fā)瘤重相當(dāng)（P＞0.05），蘇木術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重減少（P＜0.05）。肺癌荷瘤小鼠腫瘤復(fù)發(fā)瘤重抑制率分別為蘇木術(shù)前組5.69％，蘇木術(shù)后組23.57％，順鉑術(shù)前組41.46％，順鉑術(shù)后組45.53％，蘇木加順鉑術(shù)前組55.28％，蘇木加順鉑術(shù)后組70.73％。
　　3、川芎可提

12、高順鉑對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠模型原發(fā)腫瘤的抑瘤率:肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠各組體重的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，術(shù)后各組間體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。原發(fā)瘤重方面，川芎聯(lián)合順鉑組較空白組、川芎組和順鉑組減少（P＜0.05）。順鉑組原發(fā)瘤重較空白組、川芎組降低（P＜0.05）。在原發(fā)瘤抑制率方面，川芎相關(guān)各組抑瘤率為川芎組抑瘤率為-0.01％，順鉑組抑瘤率為38.63％，川芎加順鉑組抑瘤率為52.05％。
　　4、川芎可提高順鉑對(duì)肺癌干

13、細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠模型復(fù)發(fā)腫瘤的抑瘤率:與空白組、川芎術(shù)前組、川芎術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組比較，川芎加順鉑術(shù)前組、川芎加順鉑術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重明顯下降（P＜0.05），川芎加順鉑術(shù)前組與川芎加順鉑術(shù)后組表達(dá)相當(dāng);與空白組、川芎術(shù)前組、川芎術(shù)后組比較，順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重明顯下降(P＜0.05)，順鉑術(shù)前組與順鉑術(shù)后組相當(dāng)。與空白組比較，川芎術(shù)前組、川芎術(shù)后組復(fù)發(fā)瘤重相當(dāng)(P＞0.05)。肺癌荷瘤小鼠腫瘤復(fù)發(fā)瘤重抑制率分別為川

14、芎術(shù)前組0.8％，川芎術(shù)后組3.23％，順鉑術(shù)前組40.32％，順鉑術(shù)后組45.97％，川芎加順鉑術(shù)前組54.03％，川芎加順鉑術(shù)后組54.03％。
　　二、活血藥蘇木、川芎通過(guò)具體的分子調(diào)控機(jī)制實(shí)現(xiàn)抑瘤作用
　?。ㄒ唬┨K木、川芎使HIF-1α在實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型中的表達(dá)減少1、HIF-1α在經(jīng)蘇木干預(yù)后的原發(fā)腫瘤模型的表達(dá)減少:Western Blot法檢測(cè)蘇木相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織HIF-1α的表達(dá)強(qiáng)度方面，蘇木聯(lián)合順鉑組較順鉑

15、組、蘇木組、空白組HIF-1α表達(dá)少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），順鉑組HIF-1α表達(dá)較蘇木組及空白組少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），蘇木組較空白組HIF-1α表達(dá)量少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。免疫組化法檢測(cè)HIF-1α的表達(dá)，乏氧環(huán)境較常氧環(huán)境條件下培養(yǎng)的干細(xì)胞樣細(xì)胞接種到小鼠體內(nèi)后HIF-1α的表達(dá)增多。原發(fā)瘤組織中，蘇木聯(lián)合順鉑組較順鉑組、蘇木組、空白組HIF-1α的表達(dá)強(qiáng)度降低。順鉑組較蘇木組、空白組HI

16、F-1α的表達(dá)強(qiáng)度降低。蘇木組較空白組HIF-1α的表達(dá)強(qiáng)度相當(dāng)。
　　2、HIF-1α在經(jīng)蘇木干預(yù)后的腫瘤復(fù)發(fā)模型中的表達(dá)減少:Western Blot法檢測(cè)蘇木相關(guān)各組對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1α表達(dá)方面，蘇木相關(guān)各組小鼠復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1α的表達(dá)強(qiáng)度排序?yàn)?空白手術(shù)組=蘇木術(shù)前組＞蘇木術(shù)后組＞順鉑術(shù)前組＞順鉑術(shù)后組=蘇木加順鉑術(shù)前組＞蘇木加順鉑術(shù)后組。表明蘇木加順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、

17、蘇木術(shù)前組HIF-1α表達(dá)量更少（P＜0.05）。蘇木加順鉑術(shù)前組與順鉑術(shù)后組HIF-1α表達(dá)量相當(dāng)，較順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組HIF-1α表達(dá)量更少(P＜0.05)。順鉑術(shù)前組較蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組HIF-1α表達(dá)量更少(P＜0.05)。蘇木術(shù)后組較蘇木術(shù)前組HIF-1α表達(dá)量更少（P＜0.05）。蘇木術(shù)前組與空白手術(shù)組HIF-1α表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）。免疫組化法檢測(cè)HIF-1α的表達(dá)，在復(fù)發(fā)瘤組織中，蘇木術(shù)前組及蘇木

18、術(shù)后組較空白組HIF-1α的表達(dá)相當(dāng)，蘇木加順鉑術(shù)后組、蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組HIF-1α的表達(dá)較蘇木術(shù)前組、蘇木術(shù)后組和空白組降低，但各組間未見(jiàn)顯著差異。
　　3、HIF-1α在經(jīng)川芎干預(yù)后的原發(fā)腫瘤模型的表達(dá)減少: Western Blot法檢測(cè)川芎相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織HIF-1α的表達(dá)強(qiáng)度方面，川芎聯(lián)合順鉑組較順鉑組、川芎組、空白組HIF-1α表達(dá)較少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，順鉑組HIF-1α表

19、達(dá)較川芎組及空白組較少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），川芎組較空白組HIF-1α表達(dá)量較少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。免疫組化法檢測(cè)原發(fā)瘤組織HIF-1α的表達(dá)，川芎加順鉑組與順鉑組表達(dá)比較，HIF-1α的表達(dá)未見(jiàn)顯著差異，較川芎組和空白組HIF-1α表達(dá)明顯下調(diào)。川芎組與空白組比較，HIF-1α的表達(dá)相當(dāng)。
　　4、HIF-1α在經(jīng)川芎干預(yù)后的復(fù)發(fā)腫瘤模型中的表達(dá)減少:Western Blot法檢測(cè)川芎相關(guān)各組對(duì)復(fù)發(fā)

20、瘤組織HIF-1α表達(dá)方面，川芎相關(guān)各組對(duì)小鼠復(fù)發(fā)瘤組織HIF-1α的表達(dá)強(qiáng)度影響的排序?yàn)?空白組=川芎術(shù)前組＞川芎術(shù)后組＞順鉑術(shù)前組＞順鉑術(shù)后組=川芎加順鉑術(shù)前組＞川芎加順鉑術(shù)后組。表明川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、K手術(shù)組可以明顯抑制轉(zhuǎn)移瘤組織HIF-1α的表達(dá)(P＜0.05)。川芎加順鉑術(shù)前組與順鉑術(shù)后組比較，HIF-1α的表達(dá)相當(dāng)(P＞0.05)，但較順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、

21、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組表達(dá)更少（P＜0.05）。順鉑術(shù)前組較川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組HIF-1α的表達(dá)更少（P＜0.05）。川芎術(shù)后組較川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組HIF-1α的表達(dá)更少(P＜0.05)。川芎術(shù)前組與空白手術(shù)組HIF-1α的表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）。免疫組化法檢測(cè)HIF-1α的表達(dá)，在復(fù)發(fā)瘤組織中，川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前、順鉑術(shù)后組、川芎術(shù)前組、川芎術(shù)后組、空白手術(shù)組HIF-1α表達(dá)減少。川芎加

22、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前、順鉑術(shù)后組HIF-1α的表達(dá)相當(dāng)。川芎術(shù)前與川芎術(shù)后組較空白手術(shù)組HIF-1α表達(dá)相當(dāng)。
　?。ǘ┥掀らg質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型中的表達(dá)出現(xiàn)變化
　　1、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在經(jīng)蘇木干預(yù)后的原發(fā)腫瘤模型中的表達(dá)出現(xiàn)變化:
　　(1) E-Cad表達(dá)增多，Western blot法檢測(cè)蘇木相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織E-Cad表達(dá)方面，低氧濃度環(huán)境較常氧環(huán)境下培養(yǎng)的干細(xì)胞樣細(xì)胞接種到小鼠體內(nèi)的原發(fā)瘤組

23、織E-Cad表達(dá)弱于常氧環(huán)境(P＜0.05)。蘇木加順鉑組較順鉑組、蘇木組、空白組E-Cad表達(dá)量增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。蘇木組及順鉑組E-Cad的表達(dá)與空白組相當(dāng)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。免疫組化法檢測(cè)蘇木對(duì)原發(fā)瘤組織E-Cad表達(dá)量的影響，常氧環(huán)境培養(yǎng)較低氧環(huán)境培養(yǎng)的PG-BE1干細(xì)胞樣細(xì)胞接種到肺癌荷瘤小鼠體內(nèi)的E-Cad表達(dá)強(qiáng)度增加。各用藥組與空白組相比，E-Cad的表達(dá)無(wú)明顯差異。
　　(2) CD44

24、V6的表達(dá)減少，Western blot法檢測(cè)蘇木相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織CD44V6表達(dá)方面，低氧環(huán)境較常氧環(huán)境下的干細(xì)胞樣細(xì)胞接種到小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的原發(fā)瘤組織CD44V6的表達(dá)較常氧環(huán)境無(wú)明顯差異（P＞0.05）。蘇木加順鉑術(shù)前組較順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組CD44V6表達(dá)較少(P＜0.05)，順鉑組較蘇木組、空白組CD44V6的表達(dá)較少(P＜0.05)，蘇木組較空白組CD44V6的表達(dá)較少（P＜0.05）。免疫組化法檢測(cè)蘇木對(duì)原

25、發(fā)瘤組織CD44V6表達(dá)量影響，蘇木相關(guān)各組CD44V6熒光表達(dá)強(qiáng)度相當(dāng)。
　　(3)β1整合素表達(dá)減少，Western blot法檢測(cè)蘇木相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織β1整合素表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)低氧環(huán)境下培養(yǎng)的干細(xì)胞樣細(xì)胞接種到小鼠體內(nèi)后較常氧環(huán)境β1整合素的表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）。蘇木加順鉑組較DDP組、蘇木組、空白組β1整合素表達(dá)較少(P＜0.05)，順鉑組較蘇木組、空白手術(shù)組β1整合素表達(dá)較少（P＜0.05），蘇木組較空白手術(shù)組

26、β1整合素的表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）。免疫組化法檢測(cè)蘇木對(duì)原發(fā)瘤組織β1整合素表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)在常氧環(huán)境較低氧環(huán)境下培養(yǎng)的PG-BE1干細(xì)胞樣細(xì)胞接種到小鼠后的β1整合素表達(dá)量相當(dāng)（P＞0.05）。蘇木加順鉑組較順鉑組、蘇木組、空白手術(shù)組β1整合素表達(dá)量較低，順鉑組較蘇木組、空白組β1整合素表達(dá)量較低。蘇木組β1整合素表達(dá)量較空白組降低。
　　2、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在經(jīng)蘇木干預(yù)后的復(fù)發(fā)腫瘤模型中的表達(dá)出現(xiàn)變化:
　　(1

27、) E-Cad表達(dá)增多，Western Blot法檢測(cè)蘇木相關(guān)各組對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達(dá)方面，蘇木加順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，較蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組表達(dá)量相當(dāng)(P＞0.05)。蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達(dá)量相當(dāng)，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。免疫組化法

28、檢測(cè)蘇木對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達(dá)量，蘇木加順鉑術(shù)后組E-Cad表達(dá)量較空白手術(shù)組、蘇木術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、蘇木加順鉑術(shù)前組增加。蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達(dá)量相當(dāng)。
　　(2) CD44V6的表達(dá)減少，Western blot法檢測(cè)蘇木相關(guān)各組對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6表達(dá)方面，蘇木相關(guān)各組小鼠復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6的表達(dá)強(qiáng)度排序?yàn)?空白手術(shù)=蘇

29、木術(shù)前組＞蘇木術(shù)后組＞順鉑術(shù)前組=蘇木加順鉑術(shù)前組＞順鉑術(shù)后組＞蘇木加順鉑術(shù)后組。蘇木加順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前、蘇木術(shù)后、蘇木術(shù)前、空白手術(shù)組CD44V6表達(dá)較少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。順鉑術(shù)后組較蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前、蘇木術(shù)后、蘇木術(shù)前、空白手術(shù)組CD44V6表達(dá)較少(P＜0.05)。順鉑術(shù)前組與蘇木加順鉑術(shù)前組表達(dá)相當(dāng)，較蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)表達(dá)較少（P＜0.05）。蘇木術(shù)后

30、組較空白手術(shù)、蘇木術(shù)前組CD44V6表達(dá)較少（P＜0.05）?？瞻资中g(shù)、蘇木術(shù)前組表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05）。免疫組化法檢測(cè)蘇木對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6表達(dá)量影響，蘇木相關(guān)各組CD44V6熒光表達(dá)強(qiáng)度相當(dāng)。
　　(3)β1整合素表達(dá)減少，Western blot法檢測(cè)蘇木相關(guān)各組對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)蘇木相關(guān)各組小鼠復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素的表達(dá)強(qiáng)度排序?yàn)榭瞻资中g(shù)=蘇木術(shù)前組＞蘇木術(shù)后組＞順鉑術(shù)前組＞蘇木加順鉑術(shù)前組=

31、順鉑術(shù)后組＞蘇木加順鉑術(shù)后組。蘇木加順鉑術(shù)后組較順鉑術(shù)后組、蘇木加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組可抑制復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素的表達(dá)（P＜0.05）。蘇木加順鉑術(shù)前組與順鉑術(shù)后組β1整合素的表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05），較順鉑術(shù)前組、蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組表達(dá)量少（P＜0.05）。順鉑術(shù)前組較蘇木術(shù)后組、蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)量少(P＜0.05)。蘇木術(shù)后組較蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合

32、素的表達(dá)量少（P＜0.05）。蘇木術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)量相當(dāng)(P＞0.05)。免疫組化法檢測(cè)蘇木對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)蘇木加順鉑術(shù)后組與蘇木加順鉑術(shù)前組β1整合素的表達(dá)相當(dāng)，較蘇木術(shù)前、蘇木術(shù)后、順鉑術(shù)前、順鉑術(shù)后組降低。蘇木術(shù)前、蘇木術(shù)后、順鉑術(shù)前、順鉑術(shù)后組表達(dá)相當(dāng)，未見(jiàn)明顯差異，較空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)降低。
　　3、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在經(jīng)川芎干預(yù)后的原發(fā)腫瘤模型中的表達(dá)出現(xiàn)變化:

33、>　　(1) CD44V6的表達(dá)減少，Western blot法檢測(cè)川芎對(duì)原發(fā)瘤組織CD44V6表達(dá)方面，川芎加順鉑組較順鉑術(shù)前組、川芎組、空白手術(shù)組CD44V6表達(dá)量低(P＜0.05)。順鉑組較川芎組、空白手術(shù)組CD44V6表達(dá)量低(P＜0.05)。川芎組較空白手術(shù)組CD44V6表達(dá)量低(P＜0.05)。免疫組化法檢測(cè)川芎對(duì)原發(fā)瘤組織CD44V6表達(dá)量影響，發(fā)現(xiàn)川芎相關(guān)各組CD44V6熒光表達(dá)強(qiáng)度相當(dāng)。
　　(2)β1整合素表達(dá)

34、減少，Western blot法檢測(cè)川芎相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織β1整合素表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)川芎加順鉑組較順鉑組、川芎組、空白手術(shù)組β1整合素表達(dá)量顯著較少(P＜0.05)。順鉑組較川芎組、空白手術(shù)組β1整合素表達(dá)量顯著較少(P＜0.05)。川芎組較空白手術(shù)組β1整合素表達(dá)量顯著較少(P＜0.05)。免疫組化法檢測(cè)川芎對(duì)原發(fā)瘤組織β1整合素表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)川芎加順鉑組較順鉑、川芎組、空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)下調(diào)。順鉑組較川芎組、空白手術(shù)

35、組β1整合素的表達(dá)下調(diào)。川芎組較空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)下調(diào)。
　　4、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在經(jīng)川芎干預(yù)后的復(fù)發(fā)腫瘤模型中的表達(dá)出現(xiàn)變化:
　　(1) E-Cad表達(dá)增多，Western blot法檢測(cè)川芎相關(guān)各組對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達(dá)方面，川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、

36、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達(dá)量相當(dāng)，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。免疫組化法檢測(cè)川芎對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達(dá)量，川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組復(fù)發(fā)瘤組織E-Cad表達(dá)量增加。川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組E-Cad表達(dá)量相當(dāng)。
　　(2) CD44V6表達(dá)減少，Western bl

37、ot法檢測(cè)川芎相關(guān)各組對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6表達(dá)的影響，川芎相關(guān)各組小鼠復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6的表達(dá)強(qiáng)度排序?yàn)?空白手術(shù)=川芎術(shù)前組＞川芎術(shù)后組=順鉑術(shù)前組=川芎加順鉑術(shù)前組＞順鉑術(shù)后組＞川芎加順鉑術(shù)后組。表明川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)可以明顯抑制復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6的表達(dá)(P＜0.05)。順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組可

38、以明顯抑制復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6的表達(dá)（P＜0.05）。川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組CD44V6表達(dá)相當(dāng)，較川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組表達(dá)較少（P＜0.05）。川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組表達(dá)相當(dāng)(P＞0.05)。免疫組化法檢測(cè)川芎對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織CD44V6表達(dá)量影響，川芎相關(guān)各組CD44V6熒光表達(dá)強(qiáng)度相當(dāng)（P＞0.05）。
　　(3)β1整合素表達(dá)減少，Western blot法檢測(cè)川芎相關(guān)各組對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素表達(dá)量的影

39、響，發(fā)現(xiàn)川芎相關(guān)各組對(duì)小鼠復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素的表達(dá)強(qiáng)度影響排序?yàn)?空白手術(shù)=川芎術(shù)前組＞川芎術(shù)后組＞順鉑術(shù)前組＞川芎加順鉑術(shù)前組=順鉑術(shù)后組＞川芎加順鉑術(shù)后組。川芎加順鉑術(shù)后組較川芎加順鉑術(shù)前組、順鉑術(shù)后組、順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組可明顯抑制β1整合素的表達(dá)（P＜0.05），順鉑術(shù)后組與川芎加順鉑術(shù)前組β1整合素的表達(dá)相當(dāng)（P＞0.05），較順鉑術(shù)前組、川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)量少（P＜

40、0.05）。順鉑術(shù)前組較川芎術(shù)后組、川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)量少（P＜0.05）。川芎術(shù)后組較川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)量少(P＜0.05)。川芎術(shù)前組、空白手術(shù)組β1整合素的表達(dá)量相當(dāng)（P＞0.05）。免疫組化法檢測(cè)川芎對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織β1整合素表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)β1整合素表達(dá)強(qiáng)度排序?yàn)榭瞻资中g(shù)=川芎術(shù)前組＞川芎術(shù)后組＞順鉑術(shù)前組＞川芎加順鉑術(shù)前組=順鉑術(shù)后組＞川芎加順鉑術(shù)后組。
　　研究結(jié)論:
　　

41、一、活血藥具備輔助化療藥順鉑適度抑瘤的作用
　　1、蘇木不會(huì)對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠成瘤時(shí)間產(chǎn)生影響，但蘇木聯(lián)合順鉑組可延長(zhǎng)順鉑組的成瘤時(shí)間。蘇木并未對(duì)肺癌荷瘤小鼠原發(fā)瘤重產(chǎn)生影響，但蘇木可以協(xié)同順鉑增加對(duì)原發(fā)瘤重的抑制作用。
　　2、手術(shù)后使用蘇木可以協(xié)同順鉑發(fā)揮對(duì)小鼠復(fù)發(fā)瘤的抑制作用，而且這種抑制作用較術(shù)前使用蘇木加順鉑的抑制作用更明顯。在手術(shù)后使用蘇木可對(duì)復(fù)發(fā)瘤產(chǎn)生一定程度的抑制作用。
　　3、川芎不會(huì)對(duì)肺癌干

42、細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠成瘤時(shí)間產(chǎn)生影響，但川芎聯(lián)合順鉑組可延長(zhǎng)順鉑組的成瘤時(shí)間。川芎并未對(duì)肺癌荷瘤小鼠原發(fā)瘤重產(chǎn)生影響，但川芎可以協(xié)同順鉑增加對(duì)原發(fā)瘤重的抑制作用。
　　4、手術(shù)后及手術(shù)前使用川芎可以協(xié)同順鉑發(fā)揮對(duì)小鼠復(fù)發(fā)瘤的抑制作用，手術(shù)前與手術(shù)后的抑制作用相當(dāng)。在手術(shù)后使用川芎并未對(duì)復(fù)發(fā)瘤產(chǎn)生一定的抑制作用，但川芎可以協(xié)同順鉑增加對(duì)復(fù)發(fā)瘤的抑制作用。
　　二、活血藥抑瘤作用的分子機(jī)制
　?。ㄒ唬┗钛幨笻IF-1α在實(shí)

43、驗(yàn)?zāi)[瘤模型中的表達(dá)減少
　　1、蘇木協(xié)同順鉑使用可以抑制原發(fā)瘤組織中HIF-1α的表達(dá)，而且這種抑制效果要優(yōu)于順鉑和蘇木單獨(dú)使用。
　　2、手術(shù)后使用蘇木可以協(xié)同順鉑發(fā)揮對(duì)小鼠模型復(fù)發(fā)瘤中HIF-1α的表達(dá)抑制作用，而且這種抑制作用較術(shù)前使用蘇木加順鉑的抑制作用更明顯。在手術(shù)后使用蘇木可對(duì)復(fù)發(fā)瘤模型中HIF-1α的表達(dá)產(chǎn)生一定程度的抑制作用。
　　3、川芎可以協(xié)同順鉑增加對(duì)原發(fā)瘤組織模型中HIF-1α的表達(dá)抑制作用，而

44、且這種抑制效果要優(yōu)于順鉑和蘇木單獨(dú)使用。
　　4、川芎可以協(xié)同順鉑發(fā)揮對(duì)小鼠術(shù)后復(fù)發(fā)瘤中HIF-1α的表達(dá)抑制作用，而術(shù)前使用川芎并不能起到這種抑制作用。
　?。ǘ┥掀らg質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子在實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型中的表達(dá)出現(xiàn)變化
　　1、蘇木可以協(xié)同順鉑增加原發(fā)瘤組織E-Cad的表達(dá)，減少CD44V6、β1整合素的表達(dá)抑制作用，其中對(duì)CD44V6的抑制作用要強(qiáng)于順鉑、蘇木單獨(dú)使用，而蘇木組并未對(duì)原發(fā)瘤組織E-Cad、β1整合素表達(dá)

45、起到作用，蘇木相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織CD44S的表達(dá)并未產(chǎn)生影響。
　　2、蘇木可以協(xié)同順鉑增加對(duì)小鼠復(fù)發(fā)瘤模型E-Cad的表達(dá)，減少CD44V6、β1整合素的表達(dá)，但術(shù)前使用蘇木加順鉑、術(shù)前使用順鉑、術(shù)后使用順鉑、術(shù)前用蘇木、術(shù)后用蘇木對(duì)E-Cad的抑制作用不明顯，術(shù)前使用蘇木并未增加順鉑對(duì)CD44V6的抑瘤作用，可增加順鉑對(duì)β1整合素的抑制作用。術(shù)后使用蘇木可以在一定程度上抑制CD44V6的表達(dá)。蘇木相關(guān)各組對(duì)CD44S表達(dá)并未

46、產(chǎn)生影響。
　　3、川芎可以協(xié)同順鉑增加對(duì)原發(fā)瘤組織CD44V6、β1整合素的抑制作用，而且對(duì)CD44V6的抑制作用要強(qiáng)于順鉑、川芎。川芎相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織E-Cad表達(dá)并未產(chǎn)生影響。川芎可對(duì)原發(fā)瘤組織β1整合素、CD44V6起到抑制作用，并不會(huì)對(duì)E-Cad的表達(dá)產(chǎn)生抑制作用。川芎相關(guān)各組對(duì)原發(fā)瘤組織CD44S的表達(dá)并未產(chǎn)生影響。
　　4、川芎可以協(xié)同順鉑增加對(duì)小鼠復(fù)發(fā)瘤模型E-Cad的表達(dá)，減少CD44V6、β1整合素的

47、表達(dá)，但術(shù)前使用川芎加順鉑、術(shù)前使用順鉑、術(shù)后使用順鉑、術(shù)前用川芎、術(shù)后用川芎對(duì)E-Cad的表達(dá)增加作用不明顯，術(shù)前使用川芎并未增加順鉑對(duì)CD44V6表達(dá)的抑制作用，可明顯增加順鉑對(duì)β1整合素的表達(dá)抑制作用。術(shù)后使用川芎可以在一定程度上抑制CD44V6、β1整合素的表達(dá)。川芎相關(guān)各組對(duì)CD44S表達(dá)并未產(chǎn)生影響。
　　綜上所述，在腫瘤生長(zhǎng)模型中，合理應(yīng)用蘇木、川芎配合順鉑化療可以增強(qiáng)對(duì)原發(fā)瘤的抑制作用，而且這種抑制作用比單純用順鉑

48、更顯著。在術(shù)后復(fù)發(fā)模型中，手術(shù)后應(yīng)用中藥聯(lián)合順鉑對(duì)復(fù)發(fā)瘤組織的抑制作用最佳。這也為臨床上合理選擇活血藥的應(yīng)用時(shí)機(jī)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　創(chuàng)新性:
　　一、建立PG干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠手術(shù)模型，觀察蘇木、川芎對(duì)肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠腫瘤原發(fā)和復(fù)發(fā)模型的影響，發(fā)現(xiàn)蘇木、川芎具有一定的抑制肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤模型的作用，查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
　　二、蘇木、川芎抑制肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞荷瘤小鼠腫瘤原發(fā)模型和