胎兒干細胞的分離鑒定和干細胞對腫瘤細胞惡性表型影響的研究.pdf

1、該研究分為以下二個部分:第一部分,建立體外培養(yǎng)胎兒干細胞的有效方法,為研究干細胞對腫瘤細胞惡性表型的影響提供理想的干細胞來源.該實驗室應用原代細胞培養(yǎng)技術(shù),從4-6個月引產(chǎn)胎兒的骨髓、肝臟、腎臟、心肌、骨骼肌和胃腸等組織中分離培養(yǎng)干細胞.顯微鏡下觀察:培養(yǎng)的原代細胞生長健康,增殖較快,且細胞形態(tài)具有一定的組織特異性.同時對骨髓第3代細胞進行干細胞標志物的生物學鑒定.結(jié)果顯示:97.2﹪的細胞呈CD105陽性,66.0﹪的細胞呈CD106

2、陽性,9.2﹪的細胞呈CD34陽性,陰性對照組結(jié)果為0.5﹪.生物學鑒定的初步結(jié)果顯示,從胎兒骨髓組織中分離培養(yǎng)成功的細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs).該研究成功地建立了體外培養(yǎng)胎兒骨髓間充質(zhì)干細胞的有效方法,所獲得的間充質(zhì)干細胞純度較高,增殖較快,適用于干細胞生物學和組織工程學的研究.第二部分,探討間充質(zhì)干細胞對腫瘤細胞惡性表型的影響.采用人胎兒皮膚真皮層的間充質(zhì)干細胞(Z3細胞)作用于

3、人肝癌細胞系H7402、人乳腺癌細胞系MCF-7和高轉(zhuǎn)移傾向人乳腺癌細胞系LM-MCF-7(具有高轉(zhuǎn)移傾向,為MCF-7細胞的轉(zhuǎn)移亞細胞克隆).首先,將相同細胞數(shù)量(1 X 10<'7>)的Z3與H7402細胞混合后,共同接種SCID(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠.結(jié)果發(fā)現(xiàn),對照組5只SCID鼠接種H7402肝癌細胞(1 X 10<'7>)7-10天后均成瘤;實驗組4只SCID鼠混合接

4、種Z3細胞和H7402細胞后在36-37天時有2只成瘤,在49天時有1只成瘤,在70天時仍有1只未成瘤.結(jié)果顯示,與對照組相比,實驗組成瘤時間明顯延長或不成瘤.為了驗證上述結(jié)果,用相同細胞數(shù)目(1 X 10<'7>)的Z3與MCF-7細胞和LM-MCF-7細胞分別混合后各接種4只SCID鼠.結(jié)果顯示,對照組接種MCF-7細胞后成瘤時間為7.7天;實驗組接種Z3/MCF-7細胞后成瘤時間為22.3天;接種LM-MCF-7細胞的對照組成瘤時

5、間為5天;接種Z3/LM-MCF-7細胞的實驗組成瘤時間為14.3天.接種后30天時處死小鼠,病理觀察顯示,對照組出現(xiàn)廣泛轉(zhuǎn)移,而混合接種的小鼠各組織中均未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移.結(jié)果發(fā)現(xiàn):混合接種的小鼠成瘤時間明顯延長,腫瘤形成體積明顯減小,說明干細胞對乳腺癌細胞具有抑制作用,且這種抑制作用與腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力有關.綜上所述,該研究成功地建立了體外分離培養(yǎng)胎兒間充質(zhì)干細胞的方法,為研究干細胞與腫瘤相互關系提供了理想的細胞來源.間充質(zhì)干細胞對腫瘤細胞