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文檔簡介
1、目的:間質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells,MSCs)在組織再生、炎癥反應及損傷修復中發(fā)揮重要作用。有研究表明MSCs對巨噬細胞的調(diào)節(jié)作用在這些過程中十分關(guān)鍵,然而這種作用的機制仍不十分明確。本研究旨在探討小鼠骨髓MSCs在正常或脂多糖(LPS)刺激條件下對巨噬細胞的極化表型和功能的影響,并對相關(guān)機制進行了初步研究,為進一步探索MSCs的免疫調(diào)節(jié)和促損傷修復機制提供依據(jù)。
方法:分離培養(yǎng)小鼠骨髓MSCs,體
2、外與小鼠巨噬細胞株RAW264.7或磁珠分選的小鼠脾臟CD11b陽性單核/巨噬細胞間接共培養(yǎng),LPS作為刺激因素,qRT-PCR及ELISA方法檢測巨噬細胞M1/M2相關(guān)因子表達水平(TNF-α、IL-6、IL-10、Arg-1);流式細胞術(shù)及免疫熒光技術(shù)檢測RAW264.7細胞M2標記CD206的表達情況;細胞計數(shù)和MTT實驗研究MSC條件培養(yǎng)基(MSC-CM)對RAW264.7細胞增殖能力的影響;Tranwell遷移實驗研究MSCs
3、對RAW264.7細胞遷移功能的影響。此外,采用Westernblot方法研究MSC-CM對RAW264.7細胞M1/M2相關(guān)信號通路NF-κB和STAT3的影響。
結(jié)果:MSCs間接接觸或上清作用于RAW264.7細胞,降低了M1型細胞因子TNF-α基因水平而升高了M2型相關(guān)基因IL-10、Arg-1表達水平。ELISA結(jié)果顯示MSC-CM能使RAW264.7細胞IL-6分泌水平降低,而使IL-10分泌水平增高。MSCs
4、培養(yǎng)上清在LPS存在的條件下能降低脾臟單核/巨噬細胞TNF-α表達水平,增高Arg-1表達水平。流式細胞術(shù)及免疫熒光結(jié)果顯示MSC-CM增加了RAW264.7細胞M2型標記CD206表達。同時,細胞計數(shù)結(jié)果表明MSC-CM作用組與對照組相比能增加RAW264.7細胞數(shù)量,MTT實驗也證實了這一結(jié)果。在有或無LPS刺激的條件下,MSCs能顯著增加RAW264.7細胞的遷移數(shù)量。Westernblot結(jié)果顯示,MSC-CM抑制LPS誘導的N
5、F-κB活化,降低NF-κBp65入核及磷酸化p65表達量,抑制下游炎性基因IL-1β和TNF-α的表達水平。另一方面MSC-CM增加了JAK1和STAT3磷酸化蛋白表達水平。此外,STAT3信號抑制劑S31-201,抑制了MSC-CM對巨噬細胞IL-10和Arg-1基因表達的增強作用。
結(jié)論:小鼠骨髓MSCs能通過間接接觸或培養(yǎng)上清作用促進巨噬細胞由M1型向M2型轉(zhuǎn)化,同時增加RAW264.7細胞的增殖和遷移能力。MSC
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