基于結(jié)構(gòu)設(shè)計實(shí)現(xiàn)在一種細(xì)胞系中制備含兩種同源二聚體組分的抗體混合物.pdf

1、隨著越來越多的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)被解析，基于結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)設(shè)計成為一個研究熱點(diǎn)，為蛋白藥物尤其是治療性抗體的開發(fā)提供了一種強(qiáng)有力的手段。
　　抗體混合物能同時靶向兩個或多個抗原表位，在復(fù)雜性疾病的治療中頗具潛力，但是其制備技術(shù)上仍存在許多問題有待解決。該研究目的是通過基于結(jié)構(gòu)的抗體設(shè)計，解決兩種抗體在一個細(xì)胞中共表達(dá)時不同抗體間重鏈錯配的問題，實(shí)現(xiàn)在一個細(xì)胞系中表達(dá)產(chǎn)生含兩種同源二聚體組分的抗體混合物，從而開發(fā)一種新的抗體混合物制備技術(shù)—M

2、ix-mAb技術(shù)。
　　Mix-mAb技術(shù)的設(shè)計原理:在IgG抗體中，兩條重鏈的CH3結(jié)構(gòu)域之間存在較強(qiáng)的相互作用，是促使抗體形成二聚體的主要作用力，并且這一相互作用在不同抗體之間是高度保守的;利用靜電轉(zhuǎn)向機(jī)制，同時改變抗體CH3結(jié)構(gòu)域界面上相互配對的帶電荷氨基酸的電性，使得同一抗體的兩條重鏈之間仍保留靜電吸引作用，促進(jìn)同源二聚體的形成，而不同抗體的重鏈之間則產(chǎn)生靜電排斥作用，抑制異源二聚體的形成。
　　該研究首先對抗體Fc

3、的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，找出CH3結(jié)構(gòu)域相互作用面上關(guān)鍵的帶電荷氨基酸;合理設(shè)計一系列突變體組合;分析每組共表達(dá)產(chǎn)物的組分和性能，篩選出能有效抑制異源二聚體形成的最佳突變組合;然后根據(jù)該突變組合從一個細(xì)胞系中制備靶向EGFR的抗體混合物，并結(jié)合體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測產(chǎn)物的活性，以進(jìn)一步證明Mix-mAb技術(shù)的可行性;最后進(jìn)一步解析了該突變組合中突變型Fc的晶體結(jié)構(gòu)，闡明了突變型Fc促進(jìn)同源二聚體形成的分子機(jī)制。
　　Mix-mAb技術(shù)能夠縮減