RANKL、OPG及TNF-α在2型糖尿病伴牙周炎患者炎性牙周組織中的表達(dá).pdf

1、研究背景：骨保護(hù)素(osteoprotegerin, OPG)又稱破骨細(xì)胞抑制因子(osteoclast inhibitory factor, OCIF)，是一種能抑制破骨前體細(xì)胞(osteoclast precursor cell, OPC)分化、抑制破骨細(xì)胞(osteoclasts, OC)分化、活化成熟及細(xì)胞數(shù)量并誘導(dǎo)其凋亡的分泌型糖蛋白。OC的分化過程主要通過RANK/RANKL途徑，核因子κB受體活化因子配體( recepto

2、r activator of NF-κB Ligand, RANKL)是腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)配體超家族成員，能與位于破骨前體細(xì)胞上唯一的受體核因子κB活化因子(receptor activator of nuclear factor-kappa B, RANK)結(jié)合，將信號傳入前體細(xì)胞內(nèi),引起破骨前體細(xì)胞分化、增殖和成熟，產(chǎn)生破骨細(xì)胞[1]，進(jìn)而激活破骨細(xì)胞的形成和成熟，從而導(dǎo)致骨破壞[2

3、]。OPG作為 RANKL的誘餌受體，優(yōu)先結(jié)合 RANKL，阻斷RANKL與 RANK結(jié)合，從而防止骨破壞[3-5]。同屬于 TNF家族的腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)，能促進(jìn)牙周附著喪失，加速破骨細(xì)胞活動，刺激骨吸收，抑制膠原合成，同時能與OPG、RANKL互相影響。因此，RANKL/OPG系統(tǒng)及TNF-α可能是調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞形成和功能的關(guān)鍵[2]。
　　目的：本實驗通過對2型糖尿

4、病伴重度牙周炎患者牙周探診深度（probing depth, PD)、牙周附著喪失（attachment loss, AL）及空腹血糖（fasting blood glucose, FBG）的臨床檢查，同時，檢測OPG，RANKL及TNF-α在炎性牙周組織中的蛋白和mRNA的表達(dá)。探索在2型糖尿病牙周炎中RANKL、OPG及TNF-α的表達(dá)與PD，AL，F(xiàn)BG否具有相關(guān)性，為2型糖尿病伴牙周炎的發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制研究提供理論和實驗依據(jù)。方

5、法：本實驗分成三組：2型糖尿病伴重度牙周炎組（DM+P），單純重度牙周炎組（P）和健康對照組（H）。實驗用Williams探針檢測各個患者的牙周探診深度（PD）、牙周附著喪失（AL），拔牙前一個月檢測空腹血糖（FBG）水平。DM+P和P組患者取炎性牙周組織或（及）拔牙窩近牙槽骨吸收處肉芽組織（granulation tissue）；H組取其健康牙周組織作為對照。免疫組織化學(xué)檢測各組織中OPG、RANKL及TNF-α的蛋白表達(dá)并用Imag

6、e-Pro Plus6.0軟件做半定量分析[6]。實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（real time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR）檢測三組牙周組織中OPG、RANKL及TNF-αmRNA表達(dá)水平，用2-△△Ct（Livak）法做相對定量計算。所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗后，采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：1、臨床指標(biāo)的比較：2型糖尿病伴重度牙周炎組（

7、DM+P）和重度牙周炎組(P)的PD, AL均顯著高于健康對照組（H），各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；2型糖尿病伴牙周炎組 PD, AL稍高于單純重度牙周炎組，組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；2型糖尿病伴重度牙周炎組FBG值顯著高于單純重度牙周炎組和健康對照組，各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；FBG在牙周炎組和健康對照組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　2、免疫組織化學(xué)檢測比較：OPG在健康對照

8、組（H）牙周組織中表達(dá)最強(qiáng)，在牙周炎組（P）組、2型糖尿病伴牙周炎組（DM+P）炎性牙周組織中表達(dá)依次減弱；各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。RANKL在健康對照組牙周組織中表達(dá)最低，在重度牙周炎組、2型糖尿病伴重度牙周炎組炎性牙周組織中表達(dá)依次增高，各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。TNF-α在健康對照組牙周組織中表達(dá)最低，在重度牙周炎組、2型糖尿病伴重度牙周炎組炎性牙周組織中表達(dá)依次增高，各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P

9、<0.05）。RANKL/OPG比值在健康對照組最低，在重度牙周炎組、2型糖尿病伴重度牙周炎組依次增高，各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、RT-PCR檢測比較：OPG在健康對照組（H）牙周組織中表達(dá)最強(qiáng)，在牙周炎組（P）組、2型糖尿病伴牙周炎組（DM+P）炎性牙周組織中表達(dá)依次減弱；各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。RANKL在健康對照組牙周組織中表達(dá)最低，在牙周炎組、2型糖尿病伴重度牙周炎組炎性牙周組織

10、中表達(dá)依次增高，各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。TNF-α在健康對照組牙周組織中表達(dá)最低，在牙周炎組、2型糖尿病伴牙周炎組炎性牙周組織中表達(dá)依次增高，各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。RANKL/OPG在健康對照組（H）中最低，在牙周炎組、2型糖尿病伴牙周炎組中表達(dá)依次增高，各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　4、Pearson相關(guān)分析顯示，牙周探診深度與牙周附著喪失(r=0.735, P<0.01)

11、、RANKL(r=0.414, P<0.05)、TNF-α(r=0.419, P<0.05)、RANKL/OPG(r=0.457, P<0.01)呈正相關(guān)，與OPG(r=-0.472, P<0.05)呈負(fù)相關(guān)；牙周附著喪失與RANKL(r=0.442, P<0.05)、TNF-α(r=0.412, P<0.05)、RANKL/OPG(r=0.483, P＜0.01)呈正相關(guān)，與OPG(r=-0.473, P<0.05)呈負(fù)相關(guān)；空腹血糖

12、與RANKL/OPG(r=0.405, P<0.05)呈正相關(guān)，與PD，AL， OPG、RANKL、TNF-α無相關(guān)性（r<0.04)。OPG與 RANKL(r=-0.506, P<0.05)、RANKL/OPG(r=-0.554, P<0.01)呈負(fù)相關(guān)；RANKL與 TNF-α(r=0.429, P<0.05)、RANKL/OPG(r=0.657, P<0.01)，TNF-α與RANKL/OPG(r=0.446, P<0.05)呈正