血清OPG水平及RANKL-RANK-OPG系統(tǒng)基因多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)基因多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)研究
　　研究目的：
　　通過(guò)病例對(duì)照研究分析中國(guó)漢族女性RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)三個(gè)基因TNFSF11、TNFRSF11A和TNFRSF11B的21個(gè)標(biāo)簽SNP位點(diǎn)與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)性，探討RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)參與2型糖尿病發(fā)病的可能遺傳機(jī)制。
　　研究方法：
　　1.本病例對(duì)照研

2、究自2013年1月至2013年12月在南昌市第三醫(yī)院共招募研究對(duì)象1233例。所有研究對(duì)象均為江西南昌地區(qū)居住5年以上，彼此間無(wú)親緣關(guān)系的絕經(jīng)后漢族婦女，其中對(duì)照組患者719例正常健康人群來(lái)自課題組前期的絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松研究，病例組514例2型糖尿病患者為南昌市第三醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科住院患者。所有研究對(duì)象均填寫知情同意書。
　　2.采用自制的調(diào)查問(wèn)卷進(jìn)行登記。調(diào)查內(nèi)容包括調(diào)查內(nèi)容包括一般情況、年齡、經(jīng)濟(jì)收入、教育程度、工作情況、吸

3、煙史、飲酒史、體育鍛煉、月經(jīng)初潮、閉經(jīng)時(shí)間、婚育史、既往病史及家族史等。
　　3.測(cè)量身高、體重、腰圍、臀圍，讀數(shù)分別精確至0.5 kg和0.5 cm。采用公式體重（kg）/身高2(m)計(jì)算體重指數(shù)，腰圍(cm)/臀圍(cm)計(jì)算腰臀比。
　　4.采用歐姆龍簡(jiǎn)易體脂測(cè)量?jī)x(HBF-375)測(cè)量體脂含量檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)，歐姆龍(HEM-7200)電子血壓計(jì)檢測(cè)血壓及脈率。
　　5.所有研究對(duì)象均抽血檢測(cè)肝功能（谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷

4、草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶）、腎功能（尿素氮、血肌酐）、血脂（總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白）、血糖（空腹血糖、餐后2小時(shí)血糖）、血尿酸等指標(biāo)。所有檢測(cè)均當(dāng)日進(jìn)行，采用西門子公司的ADVIA2400全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，糖化血紅蛋白檢測(cè)采用高效液相色譜法（美國(guó)Bio-Rad公司），胰島素檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光法（德國(guó)西門子公司）。
　　6.選取RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)三個(gè)基因TNFSF11、TNFRSF11A和TNFR

5、SF11B的共21個(gè)標(biāo)簽SNP位點(diǎn)，其中TNFSF11基因6個(gè)(rs9525641、rs2277439、rs2324851、rs2875459、rs2200287、rs9533166),TNFRS F11A基因9個(gè)(rs9962159、rs4603673、rs7239261、rs4500848、rs6567270、rs1805034、rs4303637、rs4941131、rs9646629),TNFRSF11B基因6個(gè)(rs14852

6、86、rs11573869、rs3102728、rs11573819、rs2073618、rs2073617)。采用上海天昊生物信息公司開(kāi)發(fā)的多重高溫連接酶檢測(cè)反應(yīng)技術(shù)(improved multiple ligase detection reactio，iMLDR)進(jìn)行21個(gè)標(biāo)簽SNP位點(diǎn)的分型檢測(cè)。
　　研究結(jié)果：
　　1.病例組與對(duì)照組年齡無(wú)明顯差異（t=1.624，P=0.105）。2型糖尿病組中一些可能與糖尿病相關(guān)

7、的指標(biāo)明顯高于對(duì)照組，如空腹血糖、餐后2小時(shí)血糖、糖化血紅蛋白、體重、體重指數(shù)等（P均＜0.05）。此外，2型糖尿病組的甘油三酯、低密度脂蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平也明顯高于對(duì)照組（P均＜0.05），但高密度脂蛋白水平低于對(duì)照組（t=13.641，P＜0.001）。
　　2.通過(guò)溫伯格平衡定律檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TNFSF11基因的1個(gè)SNP rs9533166不符合哈溫伯格平衡（P=0.020），該SNP不列入下一步相關(guān)性分析，其余20個(gè)SNP

8、均符合哈溫伯格平衡（均P＞0.05）。
　　3.TNFRSF11B基因的2個(gè)SNP位點(diǎn)rs11573819和rs2073618等位基因頻率在病例組及對(duì)照組中分布有差異。rs11573819位點(diǎn)等位基因A(OR=0.8395％CI=0.69-0.99，P=0.026)和 rs2073618位點(diǎn)等位基因 C(OR=0.7895％CI=0.63-0.97，P=0.043)均可能降低2型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)。
　　4.以糖尿病為應(yīng)變量，所有S

9、NP位點(diǎn)為自變量進(jìn)行多因素逐步Logistic回歸分析，并校正年齡、體重指數(shù)、吸煙、飲酒和運(yùn)動(dòng)等混雜因素后，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有TNFRSF11B基因的1個(gè)SNP位點(diǎn)rs11573819與糖尿病相關(guān)(OR=0.78，95％CI=0.62-0.98, P=0.036)。
　　5.在位點(diǎn)rs11573819，A等位基因頻率在病例組為14.9％，對(duì)照組為18.3％，而G等位基因在病例組為85.1％，對(duì)照組為81.7％，在校正年齡、體重指數(shù)及

10、生活方式等因素后，等位基因A可以降低2型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.78，95％CI=0.62-0.98，P=0.036)。
　　研究結(jié)論：
　　RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)TNFRSF11B基因的1個(gè)SNP位點(diǎn)rs11573819的多態(tài)性與中國(guó)漢族女性2型糖尿病遺傳易感性相關(guān)。
　　第二部分 血清OPG水平在不同糖調(diào)節(jié)狀態(tài)人群中的差異及相關(guān)因素分析
　　研究目的：
　　觀察絕經(jīng)后女性2型糖尿病及糖尿病前期患

11、者血清OPG水平變化，分析其相關(guān)影響因素，探討血清OPG水平與胰島素抵抗的相關(guān)性。
　　研究方法：
　　1.所有271例研究對(duì)象均來(lái)自2013年1月至2013年12月南昌市第三醫(yī)院進(jìn)行絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松研究的人群。根據(jù)不同的糖耐量水平分為2型糖尿病組93例，糖調(diào)節(jié)受損組（又稱為糖尿病前期）90例，正常糖調(diào)節(jié)組88例。所有研究對(duì)象均為絕經(jīng)后漢族婦女，填寫知情同意書。
　　2.測(cè)量身高、體重、腰圍、臀圍，讀數(shù)分別精確至0.

12、5 kg和0.5 cm。采用公式體重(kg)/身高2(m)計(jì)算體重指數(shù)，腰圍(cm)/臀圍(cm)計(jì)算腰臀比。
　　3.采用歐姆龍簡(jiǎn)易體脂測(cè)量?jī)x(HBF-375)測(cè)量體脂含量檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)，歐姆龍(HEM-7200)電子血壓計(jì)檢測(cè)血壓及脈率。
　　4.所有研究對(duì)象均抽血檢測(cè)肝功能（谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶）、腎功能（尿素氮、血肌酐）、血脂（總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白）、血糖（空腹血糖、餐后2小時(shí)血

13、糖）、血尿酸等指標(biāo)。所有檢測(cè)均當(dāng)日進(jìn)行，采用西門子公司的ADVIA2400全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，糖化血紅蛋白檢測(cè)采用高效液相色譜法（美國(guó)Bio-Rad公司），血清OPG水平采用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行（美國(guó)RayBiotech公司），胰島素檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光法（德國(guó)西門子公司）。胰島素抵抗采用胰島素抵抗指數(shù)穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估(Homeostasis modelof assessment for insulin resistence index，HOMA-

14、IR)，采用公式[空腹血糖(mmol/L)×空腹胰島素(mU/mL)/22.5]計(jì)算HOMA-IR。
　　研究結(jié)果：
　　1.三組人群在年齡、體重指數(shù)、收縮壓、脈率、身高、體脂含量、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐和低密度脂蛋白等方面無(wú)組間差異（均P＞0.05）。正常糖調(diào)節(jié)組人群血清OPG濃度為（151.00±45.72）pg/ml，低于糖尿病前期人群的(169.28±64.91)pg/ml和糖尿病組的（183.20±56.53）p

15、g/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.031和P＜0.001）。糖尿病及糖尿病前期組的腰臀比、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血尿酸、甘油三酯、空腹血糖、餐后2小時(shí)血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白及HOMA-IR明顯高于對(duì)照的正常糖調(diào)節(jié)組（均P＜0.05）。
　　2.血清OPG水平與HOMA-IR呈明顯正相關(guān)(r=0.134，P=0.027)。此外，血清OPG水平還與年齡(r=0.453，P＜0.001)、腰臀比(r=0.125，P=0.039)、體脂含

16、量(r=0.213，P＜0.001)、堿性磷酸酶(r=0.175，P=0.004)、血肌酐(r=0.193，P=0.001)、餐后2小時(shí)血糖(r=0.270，P＜0.001)、糖化血紅蛋白(r=0.214，P＜0.001)等成正相關(guān)。
　　3.以血清OPG水平為應(yīng)變量，將年齡、體脂含量、腰臀比、體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、血肌酐、血尿酸、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、餐后2小時(shí)血糖、

17、糖化血紅蛋白和HOMA-IR納入模型進(jìn)行分析。通過(guò)逐步線性回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)進(jìn)入方程的為HOMR-IR（P=0.019）、年齡（P＜0.001）、餐后2小時(shí)血糖（P=0.002）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（P＜0.001）、堿性磷酸酶（P=0.003）、血肌酐(P＜0.001)和血尿酸（P=0.006），提示這些指標(biāo)可能與OPG水平相關(guān)。
　　研究結(jié)論：
　　1.絕經(jīng)后女性2型糖尿病及糖尿病前期患者血清OPG水平高于正常對(duì)照人群。