P2X3R在難治性顳葉癲癇患者及癲癇大鼠模型腦組織中表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：探討P2X3R在難治性顳葉癲癇患者顳葉皮質(zhì)和氯化鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)的癲癇大鼠模型腦組織中表達(dá)的變化，通過膜片鉗全細(xì)胞記錄觀察無鎂腦脊液誘發(fā)S-D鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢活l率加快，對P2X3R進(jìn)行干預(yù)后，觀察錐體神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢活l率的改變并分析其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　1.收集15例難治性顳葉癲癇患者病灶組織標(biāo)本和10例腦外傷手術(shù)患者相對正常的顳葉皮質(zhì)標(biāo)本。
　　2.稱重后腹腔注射氯化鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)S-

2、D大鼠產(chǎn)生急性期癲癇持續(xù)狀態(tài)，并通過視頻監(jiān)控選出2個(gè)月內(nèi)產(chǎn)生自發(fā)發(fā)作的S-D大鼠作為慢性癲癇模型，對照組腹腔注射生理鹽水進(jìn)行對照。
　　3.運(yùn)用免疫熒光技術(shù)對P2X3R在顳葉癲癇患者顳葉組織和癲癇大鼠海馬及鄰近皮質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定位，通過Western-blot技術(shù)和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測定實(shí)驗(yàn)組與對照組P2X3R蛋白和相應(yīng)mRNA表達(dá)量的變化。
　　4.S-D鼠麻醉后斷頭取腦，運(yùn)用振動(dòng)切片機(jī)切出含有清晰海馬結(jié)構(gòu)的

3、腦片，腦片厚度為350μm，并在26℃下人工腦脊液孵育1小時(shí)，之后運(yùn)用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)，通過激活或抑制P2X3R受體，觀察無鎂狀態(tài)下誘發(fā)的快速動(dòng)作電位頻率的變化。
　　結(jié)果：P2X3R在顳葉癲癇患者顳葉皮質(zhì)和癲癇大鼠海馬及鄰近皮質(zhì)的神經(jīng)元樹突和胞質(zhì)中均有表達(dá)，并且P2X3受體在癲癇患者及癲癇大鼠模型中表達(dá)升高。無鎂腦脊液可誘發(fā)S-D鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元興奮性升高，引起快速樣放電，抑制P2X3R受體后，錐體神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢活l率