血紅素活性中心組氨酸對肌紅蛋白過氧化物酶催化功能的調(diào)控研究.pdf

1、蛋白的穩(wěn)定性及正確折疊是其執(zhí)行各種生物功能的基礎(chǔ)，因此蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與功能的研究一直是生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)。肌紅蛋白（Myoglobin，Mb）是目前人類研究最多的蛋白質(zhì)之一。
　　研究人員一般通過對Mb的氨基酸進(jìn)行突變或?qū)ζ溲t素活性中心進(jìn)行修飾，來研究Mb的結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系。為了進(jìn)一步研究Mb的氨基酸殘基對蛋白結(jié)構(gòu)與功能的影響，從而進(jìn)一步了解Mb的結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系，本課題我們在大腸桿菌中表達(dá)和純化得到Mb突變體蛋白，進(jìn)而

2、用紫外可見光譜等，考察其結(jié)構(gòu)與功能。
　　通過制備感受態(tài)大腸桿菌、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、接種、擴(kuò)大培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)使突變肌紅蛋白高效表達(dá)，再經(jīng)過收菌、超聲破菌、超濾、陰離子交換層析、超濾、凝膠層析或透析純化突變肌紅蛋白，分別獲得29位亮氨酸(Leu，L)突變?yōu)榻M氨酸(His， H)的Mb突變體L29H Mb、29位亮氨酸和43位苯丙氨酸(Phe，F(xiàn))均突變?yōu)榻M氨酸的Mb突變體L29H/F43H Mb。
　　本論文通過對肌紅蛋白突變體L29

3、H Mb進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，探索Mb活性中心雙組氨酸(His29/His64)在蛋白催化功能中的作用。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：在氧化鄰甲氧基苯酚時(shí)，L29H Mb中存在的兩個(gè)組氨酸起到協(xié)同作用，L29H Mb的過氧化物酶活性比野生型Mb（wild-type Mb，WT Mb）的過氧化物酶活性高3.7倍。
　　此外，突變體L29H/F43H Mb中三個(gè)遠(yuǎn)端組氨酸形成金屬結(jié)合位點(diǎn)，本論文分別研究L29H/F43H Mb的過氧化物酶活性及其結(jié)合了Cu(