不同組織來源的非整合iPS體系的建立及其造血分化差異性研究.pdf

1、造血干細(xì)胞移植（hemopoietic stem cell transplantation，HSCT）用于血液系統(tǒng)疾病的治療已取得迅猛發(fā)展。但由于供體有限及配型效率不高等問題，嚴(yán)重阻礙了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。因此人們迫切地尋求更為安全、經(jīng)濟(jì)和有效的造血干細(xì)胞的資源。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞是類似于胚胎干細(xì)胞的一種多能性細(xì)胞，它可以向多向分化，將其誘導(dǎo)為造血干/祖細(xì)胞可為臨床治療惡性血液病提供良好的供體。于此同時，iPS的供體細(xì)胞可來自多種組織，例

2、如皮膚成纖維、羊水細(xì)胞、外周血、尿液等等。目前，體細(xì)胞的表觀遺傳和組織記憶性對于iPSCs的分化潛能是否有影響仍存在著爭議。本研究利用不同組織來源的iPSCs向造血分化用于驗證是否存在組織記憶性。
　　方法：
　　本實驗利用非整合型仙臺病毒的方法建立三種不同組織來源（皮膚成纖維細(xì)胞、羊水細(xì)胞、外周血單個核細(xì)胞）的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，通過多能性免疫熒光染色、RT-PCR檢測基因表達(dá)、擬胚體體外分化實驗及畸胎瘤體內(nèi)分化實驗等驗證所建

3、iPSCs的多能性。同時利用iPSCs與基質(zhì)細(xì)胞OP9共培養(yǎng)、利用擬胚體EB法在體外誘導(dǎo)其向造血方向分化。比較不同組織來源的iPSCs造血分化的差異。再通過Human Methylation450 BeadChip芯片來檢測造成造血分化差異是否與組織記憶性相關(guān)。通過比對分析結(jié)果，數(shù)據(jù)分析，尋找出造成差異的特異性基因。
　　結(jié)果與結(jié)論：
　　我們建立了三種不同來源的iPSCs共3株細(xì)胞，通過RT-PCR檢測到iPSCs內(nèi)源性多