EPO對橫紋肌溶解致急性腎損傷的保護作用機制研究.pdf

1、背景和目的：
　　急性腎損傷（AcuteKidneyInjury，AKI）作為一種臨床常見急、危重癥。而橫紋肌溶解(Rhabdomyolysis，RM)性急性腎損傷是AKI的一種，占所有AKI患者的10％～15％[1-4]。到目前為止，主要以擴容、利尿、糾正電解質(zhì)紊亂及血液凈化等對癥治療，但療效不佳，AKI患者的發(fā)病率及死亡率仍居高位。所以預防、減少橫紋肌溶解后AKI的發(fā)生有重要的意義。促紅細胞生成素(Erythropoietin

2、，EPO)是一種分子量為30.4kD的糖蛋白，主要由腎臟皮質(zhì)、髓質(zhì)交界處的腎小管旁細胞分泌。EPO可以通過抑制氧化應激、抑制炎癥反應、抗細胞凋亡、促進腎小管細胞的再生等對急性腎損傷起保護作用。EPO對腎臟具有保護作用的研究多集中在腎毒性及缺血再灌注性AKI中。EPO對橫紋肌溶解性AKI動物模型是否通過抗炎和抗凋亡共同作用從而減輕腎小管上皮細胞損傷、凋亡,促進腎小管上皮細胞恢復,目前文獻報道較少。本研究擬通過建立成年大鼠RMAKI模型，檢

3、測予EPO干預后不同時間點MCP-1和Bcl-2變化情況，評價MCP-1和Bcl-2在EPO干預后腎臟的表達情況，探討EPO對AKI的作用機制。以期找到EPO在治療橫紋肌溶解導致急性腎損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，為大批出現(xiàn)橫紋肌溶解患者預防急性腎損傷提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　以SPF級雄性SD大鼠為實驗對象，予肌肉內(nèi)注射50％甘油(10ml/Kg)，建立急性腎損傷模型。將36只SD大鼠按數(shù)字隨機表法分為3組，正常對照組（CN組）、

4、急性腎損傷組（AKI組）、促紅細胞生成素干預組（EPO組），每組12只。各組又按時間點分為24h組和48h組兩個亞組，每組6只。分別于24h、48h腹腔注射10%水合氯醛（0.3ml/kg）麻醉，腹正中線切開，下腔靜脈采血后處死，留取左腎組織做石蠟切片。全血離心后留取血清，保存于-20℃冰箱，留測血清肌酐、尿素氮、磷酸肌酸激酶及肌紅蛋白。左腎組織置于10%中性福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋以做常規(guī)HE染色觀察腎組織病理變化，免疫組織化學染

5、色觀察MCP-1和Bcl-2的表達及分布。
　　結(jié)果：
　　1、CN組大鼠精神狀態(tài)好,反應敏銳,自由活動。肌注50%甘油生理鹽水后,AKI組大鼠注射部位出現(xiàn)局部水腫,活動困難,無法站立,體毛無光澤,拒進食水,精神差,對聲光等刺激反應遲鈍,約2h出現(xiàn)紅棕色、深褐色尿，24h尿量明顯較少,甚至無尿,48h后上述癥狀均好轉(zhuǎn)。與同時間點的AKI組相比較,EPO組大鼠一般情況及精神狀態(tài)較好。
　　2、甘油生理鹽水誘導發(fā)生急性腎損

6、傷后,AKI組及EPO組的Mb、BUN、Scr、及CK均顯著高于CN組(P<0.05)。與同時間點的AKI組相比較,EPO組Mb、BUN、Scr和CK明顯降低(P<0.05)。
　　3、光鏡：CN組腎組織無明顯改變。AKI組及EPO組發(fā)生急性腎損傷，有缺血缺氧表現(xiàn)腎小球囊擴張、毛細血管袢被擠壓至血管極測，近端腎小管上皮細胞水腫，呈空泡樣變性，腎間質(zhì)水腫、間質(zhì)內(nèi)有大量炎癥細胞浸潤及腎小管上皮細胞刷狀緣脫落、細胞核深染、固縮，于皮髓質(zhì)

7、交界處及髓質(zhì)區(qū)顯著，部分腎小管腔內(nèi)可見蛋白管型及顆粒管型等，腎小管損傷積分升高。與AKI組比較，EPO組腎小球及腎小管損傷程度均減輕，腎小管損傷評分降低。
　　4、腎組織Bcl-2免疫組化染色結(jié)果示：Bcl-2陽性表達為棕黃色，主要表達在腎小管細胞漿中。肌注甘油的2組大鼠24h腎組織中均存在明顯的小管細胞凋亡，EPO干預組凋亡情況減輕；所有肌注甘油的大鼠腎組織抗凋亡因子Bcl-2的蛋白質(zhì)表達均比正常對照組增加，EPO干預組增加更加

8、明顯。
　　5、腎組織MCP-1免疫組化染色結(jié)果示：CN組腎小管MCP-1蛋白為陰性表達，AKI組腎小管MCP-1蛋白為陽性表達，近曲小管及少數(shù)遠曲小管細胞胞漿內(nèi)可見彌散分布的棕色顆粒，腎小球呈弱陽性或者陰性表達。AKI組MCP-1免疫組化染色陽性面積百分比明顯高于CN組。與AKI組比較，EPO干預組MCP-1免疫組化染色陽性面積百分比明顯降低。
　　6、腎小管TUNEL法檢測結(jié)果示：甘油注射后各實驗組TUNEL陽性細胞數(shù)量

9、顯著上升，各時相點與對照組比較，差異顯著(P<0.05)，均在24h達到峰值，隨后逐漸下降。與AKI組相比較，EPO組的TUNEL陽性細胞數(shù)顯著下降(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、甘油生理鹽水法成功制作了橫紋肌溶解致急性腎損傷動物模型；
　　2、EPO可以改善腎功能，減輕腎臟病理損傷，對橫紋肌溶解所致急性腎損傷起保護作用；
　　3、EPO對大鼠的保護作用，可能是通過上調(diào)抗凋亡因子Bcl-2蛋白表達和下調(diào)M