內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白ATF4及CHOP在橫紋肌溶解致急性腎損傷中的作用及山莨菪堿的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的:高強度或特殊軍事訓練,特別是在悶熱潮濕的環(huán)境下,容易引起橫紋肌溶解(rhabdomyolysis,RM)進而導致急性腎損傷(acutekidneyinjury,AKI);已成為嚴重影響部隊戰(zhàn)斗力的重要因素。目前對其發(fā)病機制尚未明了。研究AKI損傷機制并提高其救治水平對提高部隊戰(zhàn)斗力以及軍事醫(yī)學有著重大意義。吳廣禮等人的前期研究表明腎小管上皮細胞的凋亡是導致AKI的重要機制。本研究通過給大鼠雙后肢肌注甘油生理鹽水,建立橫紋肌溶解致急

2、性腎損傷模型,應(yīng)用免疫組化和westernblot等方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵性蛋白活化的轉(zhuǎn)錄因子4(activatingtranscriptionfactor4,ATF4)、CCAAT/增強子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancerbindingproteinhomologousprotein,CHOP)的表達及山莨菪堿對其的影響,進而探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導的凋亡通路在AKI中的作用以及山良菪堿的干預(yù)效應(yīng),為急性腎損傷的防治提供新的理論

3、依據(jù)。
　　 方法:(1)健康雄性SD大鼠42只,體重200-220g,采用完全隨機分組方式分為三組:對照組(Control,CN,n=6)、急性腎損傷模型組(acutekidneyinjury,AKI,n=18)、山莨菪堿干預(yù)組(anisodamine,AD,n=18)。AKI組和AD組根據(jù)注射時間又分為三個亞組即1h組、6h組和24h組,每組6只大鼠。(2)采用給大鼠雙后肢注射甘油生理鹽水建立橫紋肌溶解致急性腎損傷的模型。(

4、3)使用全自動生化分析儀檢測生化指標血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),(4)應(yīng)用ELISA法檢測血肌紅蛋白Mb;(5)應(yīng)用光學顯微鏡觀察腎組織形態(tài)學改變;(6)應(yīng)用免疫組化和圖像分析法檢測腎組織中ATF4和CHOP的表達;(7)應(yīng)用WesternBlot方法檢測腎組織ATF4和CHOP的表達。(8)統(tǒng)計分析:實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學處理,實驗數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標準差((x)±s)表示。各組間均數(shù)比較采用單因素方差分

5、析(one-wayANOVA),相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)檢驗,以p＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:(1)與CN組比較,AKI組血漿BUN、Cr、Mb等指標均有明顯升高(p＜0.05,p＜0.01),其中血漿BUN、Cr、Mb均于肌注甘油后24小時達到高峰(p＜0.01);AD1h、AD6h、AD24h組較同期AKI組均顯著降低(p＜0.05,p＜0.01);(2)光鏡觀察HE染色發(fā)現(xiàn)CN組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)無明顯變化

6、;AKI1h、6h、24h組病理損傷逐漸加重,受損較重部位集中在皮髓交界、外髓外帶的近端腎小管,AD各組較AKI同期各組明顯減輕。(3)免疫組化圖像分析顯示:①與CN組相比,ATF4在甘油肌注1小時即發(fā)現(xiàn)表達(p＜0.01),隨著甘油作用時間的延長其表達逐漸增加,在AKI6h組達到最高(p＜0.01),但在24h組明顯下降(p＜0.01)。AD1h、AD6h、AD24h均較同期AKI各組表達減少(p＜0.05,p＜0.01)。②隨著甘油

7、作用時間的延長,腎組織中CHOP蛋白的表達呈遞增趨勢,AKI6h、24h均顯著高于對照組與AKI1h組(p＜0.01);到AKI24h達到高峰;AKI1h與對照組比較則無明顯差異(p＞0.05);除AD1h外,AD6h、AD24h均較同期AKI各組表達減少(p＜0.01);(4)WestemBlot結(jié)果顯示:在內(nèi)參GAPDH表達量基本一致的情況下,①對照組ATF4條帶顏色較淺,AKI1h,AKI6h和AKI24h條帶顏色逐漸加深,在AK

8、I6h顏色達最深;而AD各組蛋白條帶的顏色都要比同期AKI組淺,對其進行半定量分析,各組間均有統(tǒng)計學差異(p＜0.05,p＜0.01);②CHOP蛋白在對照組、AKI1h條帶顏色均較淺,隨著甘油作用時間的延長,顏色條帶逐漸加深,在AKI24條帶顏色達最深;而AD各組蛋白條帶均比同期AKI各組顏色淺,對其進行半定量分析,各組均有統(tǒng)計學差異(p＜0.05,p＜0.01)(5)相關(guān)性分析結(jié)果:血清Mb水平與BUN、Cr呈顯著正相關(guān)(r=0.8

9、72,p＜0.05;r=0.716,p＜0.05);血漿Mb水平與腎組織ATF4呈顯著負相關(guān)(r=-0.882,p＜0.01);與腎組織CHOP呈顯著正相關(guān)(r=0.993,p＜0.01)。
　　 結(jié)論:1.甘油肌注致橫紋肌溶解可通過上調(diào)腎組織CHOP的表達,激活ERS,進而引起急性腎損傷。
　　 2.甘油肌注致橫紋肌溶解早期可上調(diào)腎組織ATF4的表達發(fā)揮代償性腎損傷保護作用,隨著甘油作用時間的延長,其表達下調(diào)進而引起急