MyD88、TRAF6在橫紋肌溶解致急性腎損傷中的作用及鹽酸戊乙奎醚干預(yù)的影響.pdf

1、目的：
　　橫紋肌溶解癥（rhabdomyolysis,RM）是指由多種原因引起的橫紋肌細(xì)胞溶解、破壞，以及肌內(nèi)容物釋放進(jìn)入血液循環(huán)，導(dǎo)致的生化紊亂及多臟器損傷的臨床綜合征。近年來，隨著生活習(xí)慣的變化，由于長跑、進(jìn)食小龍蝦、醉酒等導(dǎo)致的RM發(fā)病率明顯升高，嚴(yán)重者危及患者生命。腎臟是RM最多見的受累器官，急性腎損傷(acutekidneyinjury，AKI)伴隨RM整個(gè)病程，部分發(fā)展至急性腎衰竭的患者由于缺乏有效治療而不愈。研究發(fā)

2、現(xiàn)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、Ca2+穩(wěn)態(tài)失調(diào)、細(xì)胞的毒性作用、活性氧以及自由基等是其重要病理生理機(jī)制，其中炎癥反應(yīng)作為人類絕大多數(shù)損傷性疾病的重要病理機(jī)制，在急性腎損傷中的作用尤其受到重視。髓樣細(xì)胞分化因子88（Myeloidifferentiationfactor88,MyD88）和腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(Tumour-necrosisfactorreceptor-associatedfactor6,TRAF6)為炎癥反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白

3、，在多條信號途徑中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)通過肌注甘油建立大鼠橫紋肌溶解致急性腎損傷的動(dòng)物模型，觀察腎臟損傷情況，并應(yīng)用免疫組化染色和westernblot方法檢測大鼠腎臟MyD88和TRAF6的表達(dá)，對橫紋肌溶解致急性腎損傷的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究，同時(shí)觀察了鹽酸戊乙奎醚干預(yù)對其保護(hù)作用。通過我們的研究有望對橫紋肌溶解致急性腎損傷的發(fā)病機(jī)制有進(jìn)一步了解，對臨床防治提供理論及實(shí)踐依據(jù)。
　　方法:
　　將42只清潔級SD大鼠隨機(jī)分為:

4、①對照組(Control，CN組,n=6)：給大鼠雙后肢肌注生理鹽水；②急性腎損傷模型組(AKI組，n=18)，給大鼠雙后肢注射甘油；③鹽酸戊乙奎醚組(PenehyclidineHydrochloride,P組,n=18)，在甘油肌注前30分鐘分別腹腔注射鹽酸戊乙奎醚。AKI組和P組根據(jù)注射及取材時(shí)間又分為三個(gè)亞組：1h組、6h組和24h組，每組6只大鼠。在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)腹腔麻醉后，收集血液及腎組織標(biāo)本。對血清指標(biāo)行肌酐（Scr）、尿素氮（

5、BUN）和磷酸肌酸激酶(CK)測定；腎臟組織行HE染色，觀察病理學(xué)改變；應(yīng)用免疫組化染色及westernblot法檢測腎組織MyD88和TRAF6蛋白的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用IBMSPSS21.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，以P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　?。?）與CN組比較，AKI組BUN、Cr、CK均明

6、顯增高（P<0.01），其中BUN、Cr濃度呈逐漸升高趨勢，CK也升高，但在6小時(shí)達(dá)到高峰，后回落。P組BUN、Cr、CK濃度較對照組也明顯升高（P<0.01），且與AKI組趨勢相同，但與同期AKI組相比，Cr、BUN濃度明顯降低（P<0.05，P<0.01），CK濃度下降不明顯（P>0.05）。（2）HE染色顯示CN組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)完整、形態(tài)無明顯變化；AKI1h組腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)欠清、輕度水腫、呈顆粒狀變性，腎小球皺縮；AKI6h

7、組可見腎小管管腔擴(kuò)張，小管上皮細(xì)胞腫脹、空泡樣變，管腔內(nèi)出現(xiàn)大量管型，間質(zhì)內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤；AKI24組腎小管管腔明顯擴(kuò)張,部分腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)壞死、脫落、刷狀緣消失，遠(yuǎn)端腎小管腔內(nèi)可見管型，P各組較同期AKI組損傷明顯減輕；（3）免疫組化結(jié)果顯示：1）MyD88在CN組大鼠腎組織中有微弱表達(dá)，與CN組相比，在AKI1h、AKI6h、AKI24h組表達(dá)逐漸增加（P<0.01），P組也隨時(shí)間表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05，P<0.01)；P1h、

8、P6h、P24h組較同期AKI各組表達(dá)減少（P<0.05,P<0.01）。2）TRAF6在CN組大鼠腎組織中表達(dá)量較少，在AKI1h、AKI6h、AKI24h組，腎組織TRAF6蛋白的表達(dá)逐步升高，均明顯高于對照組（P<0.01），P組與CN組比較在6h、24h組隨時(shí)間增強(qiáng)(P<0.01)，1h組增強(qiáng)不明顯(P>0.05)；P1h、P6h、P24h組較同期AKI各組表達(dá)減少（P<0.05,P<0.01）；（4）WestenBlot結(jié)果顯

9、示：MyD88、TRAF6蛋白含量AKI1h，AKI6h和AKI24h均明顯高于正常腎臟組織，且進(jìn)行性升高（P<0.01）；MyD88在P各組蛋白表達(dá)與CN組相比均明顯升高，與同期AKI組相比明顯降低，各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05,P<0.01），TRAF6在P組表達(dá)也隨著時(shí)間上調(diào)，但在1h組上調(diào)不明顯(P>0.05)，在6h、24h組強(qiáng)于CN組(P<0.01)；P組腎組織TRAF6表達(dá)與同期AKI組相比均下調(diào)(P<0.05，P<