2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性不僅在發(fā)揮其生物功能時(shí)具有重要的作用,而且在蛋白質(zhì)工程,包括蛋白質(zhì)設(shè)計(jì),再折疊、貯存和運(yùn)輸中具有重要的意義。肌酸激酶(CK)是研究蛋白質(zhì)折疊和穩(wěn)定性的一個(gè)理想的模型蛋白。本文應(yīng)用酶動(dòng)力學(xué)和平衡態(tài)方法,研究了海藻糖和氧化三甲胺兩種滲透劑對(duì)人腦型肌酸激酶(hBBCK)穩(wěn)定性的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
   熱失活研究顯示海藻糖能有效防止hBBCK的熱失活和熱變性。1.0 M 海藻糖使hBBCK熱失活的半失活溫度(Tm)升高

2、了4.6℃,活化能由原來的29.7 kJ·mol-1 升高到 41.1 kJ·mol-1。內(nèi)源熒光光譜研究顯示在海藻糖濃度分別為0 M, 0.6 M, 0.8 M和 1.2 M時(shí),hBBCK熱變性的表觀轉(zhuǎn)變溫度(T1/2)相應(yīng)的從43.0℃上升到 46. 5℃, 47.7℃和 49.9℃。內(nèi)源熒光和ANS外源熒光光譜研究表明海藻糖的疏水作用可能對(duì)hBBCK的熱穩(wěn)定性起了重要作用。hBBCK復(fù)性動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)研究表明海藻糖能有效抑制hBBCK

3、復(fù)性時(shí)過程中聚集體的形成。
   脲變性實(shí)驗(yàn)表明海藻糖能抑制脲引起的hBBCK的失活和變性。與肌肉型肌酸激酶一樣,人腦型肌酸激酶的脲變性也為四態(tài)過程,分別在3.0 M-4.0 M脲和5.0 M-6.0 M脲濃度之間有中間體的出現(xiàn)。內(nèi)源熒光和熒光相圖法表明海藻糖的存在改變了hBBCK脲變性去折疊時(shí)的四態(tài)過程。海藻糖穩(wěn)定了hBBCK的中間體結(jié)構(gòu),延遲了hBBCK脲變性時(shí)由去折疊態(tài)向中間體的轉(zhuǎn)變過程。
   氧化三甲胺作為滲透

4、劑對(duì)hBBCK的酶活有抑制作用,脲的存在會(huì)加強(qiáng)這種抑制作用;氧化三甲胺能抑制hBBCK的熱變性,1.0 M氧化三甲胺使hBBCK的Tm和去折疊自由能分別升高了4.5℃和0.9 kJmol-1;脲增強(qiáng)了hBBCK的熱變性過程,而氧化三甲胺的存在減弱了這種作用。在pH 8.0和pH 4.0兩種pH條件下,氧化三甲胺都能抑制脲引起的hBBCK的變性。
   通過研究上述兩種滲透劑對(duì)肌酸激酶的穩(wěn)定性作用,有助于我們理解滲透劑穩(wěn)定CK的機(jī)

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