膠州灣沉積物細菌多樣性及抑菌活性研究.pdf

1、海洋環(huán)境提供了與陸地不同的環(huán)境因素，如鹽度、壓力、低溫和營養(yǎng)等，而海洋微生物因長期適應復雜的海洋環(huán)境有其特有的代謝機制。膠州灣是半封閉型海灣，本文就膠州灣沉積物中細菌的多樣性及抑菌活性進行了分析。
　　采用稀釋平板法通過YPD、Z2216E、高氏一號、M6培養(yǎng)基對膠州灣9個站點沉積物中的細菌進行分離，共分離細菌208株，去重復后得76株。根據(jù)16SrDNA克隆測序結果初步判定菌株的分類學地位，主要包括8個科11個屬的細菌：節(jié)桿菌屬

2、(Arthrobacter)、考克氏菌屬(Kocuria)、微球菌屬(Micrococcus)、微桿菌屬(Microbacterium)、假交替單胞菌屬(Pseudoalteromonas)、Oceanisphaera、海單胞菌屬(Marinomonas)、葡萄球菌屬（Staphylococcus）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、硫胺素芽孢桿菌屬（Aneurinibacillus）、短芽孢桿菌屬（Brevibacillus），表明了膠

3、州灣沉積物微生物細菌種類多樣性。
　　利用傳統(tǒng)活性篩選的方法篩選了分離菌株的抑菌活性，選用大腸桿菌(Escherichia coli)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)、白色假絲酵母(Candida albicans）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）、產(chǎn)氣腸桿菌(Enter

4、obacter aerogenes)為指示菌，結果表明檢測的76株菌中有34菌株至少對一種指示菌有抑菌活性。另根據(jù)抑菌活性選取16株代表菌進行次級代謝產(chǎn)物合成酶基因PCR篩選，檢測了PKSI、PKSII、halo、NRPS、PhzE、CYP、dTGD等基因，發(fā)現(xiàn)除PKSII、halo基因因某些原因未能成功擴增出外，這16株菌均能檢測到其余一種功能基因，證明了膠州灣微生物產(chǎn)生物活性次級代謝產(chǎn)物的潛力。
　　通過分子生物學鑒定、表型特

5、征及生理生化鑒定相結合的多相分類鑒定法對LWYT0409、LWYT1014進行了分類鑒定，確認菌株LWYT0409為芽孢桿菌屬甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌，LWYT1014為芽孢桿菌屬炭疽芽孢桿菌。
　　為進一步對LWYT0409菌株抑菌化合物進行研究，探索了該菌株抑菌化合物的理化性質(zhì)、分離條件、發(fā)酵條件等。結果表明該菌株的抑菌化合物具有較高的熱穩(wěn)定性，但對pH較敏感。嘗試了多種方法進行抑菌化合物分離，如酸沉淀法、有劑溶液萃取法、薄層層析法