南海局部海洋沉積物中真菌多樣性及產(chǎn)酶活性初步研究.pdf

1、近年來,隨著陸地資源的大量開發(fā)與利用,開發(fā)海洋資源,尤其是海洋微生物資源愈發(fā)受到人們的關(guān)注。由于海洋微生物特別的生存環(huán)境,形成了獨特的群落結(jié)構(gòu)、遺傳特性及生理機制等,使海洋微生物成為世界生物學(xué)研宄的熱點之一。海洋真菌作為海洋微生物中的一大類群,也備受研宄人員的關(guān)注。
　　本研究以11份南海海洋沉積物為材料,利用平板涂布法分離其中的海洋真菌,通過培養(yǎng)觀察真菌的形態(tài)特征,并進(jìn)行ITS序列分析,對分離出的真菌進(jìn)行初步鑒定。針對目前工業(yè)中

2、較為重要的功能酶類,利用6種篩選培養(yǎng)基對海洋真菌進(jìn)行產(chǎn)酶活性篩選,并對其中一株產(chǎn)酶活性相對較高的真菌進(jìn)行了產(chǎn)酶條件研究。研究方法和結(jié)果如下:
　　(1)利用高鹽察氏培養(yǎng)基、YPD培養(yǎng)基、玉米粉瓊脂培養(yǎng)基、MEA培養(yǎng)基、改良PDA培養(yǎng)基、沙氏培養(yǎng)基和豆芽汁培養(yǎng)基,并添加氨芐青霉素作為抑菌劑,從11份海洋沉積物樣品中共分離出1689株真菌,排除重復(fù),初步歸類為41株真菌。確定最佳分離培養(yǎng)基為YPD培養(yǎng)基。經(jīng)形態(tài)學(xué)研宄和ITS序列分析,

3、初步將這些真菌鑒定為15個屬:枝頂抱屬(Jcrewow+Mw)Acrodontium、鏈格抱屬(A/terar/a)、曲霉屬(A^sperg///"5)、煙管菌屬(Bjerkandera)、毛殼菌屬(Chaetomium)、枝抱屬(Cladosporium)、Dichotomomyces、散囊菌屬(EUrotium)、赤霉菌屬(Gibberella)、Myrmecridium、擬青霉屬(Paecibmyces)、青霉屬(PeniciHi

4、um)、Pseudozyma、酵母屬(Xaccharomyces)。其中,曲霉屬(Aspergi^us)和青霉屬(Peniciffi^m)為優(yōu)勢菌群,分別占39.00％和12.20%。菌株8m、25m和95a只能鑒定到屬,其余38株真菌鑒定為25個形態(tài)種。
　　(2)采用透明圈法,將已測序的41株真菌點接于酶篩選培養(yǎng)基上,每個真菌在平板上點接3個重復(fù),280C恒溫培養(yǎng)3-7d。測量不同菌株的透明圈直徑和菌落直徑,以透明圈直徑與菌落

5、直徑的差值(D)表示酶活大小。結(jié)果表明,8株真菌產(chǎn)纖維素酶,9株真菌產(chǎn)淀粉酶,5株真菌產(chǎn)復(fù)合酶(主要包括蛋白酶、淀粉酶及木聚糖酶活性),16株真菌產(chǎn)蛋白酶,3株真菌產(chǎn)脂肪酶,未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)殼聚糖酶的真菌菌株;其中有7株真菌同時產(chǎn)三種酶,4株真菌同時產(chǎn)兩種酶。產(chǎn)酶活性大小研究表明,菌株P(guān)enicillium sp.41m產(chǎn)蛋白酶活性相對較高,而Acrodontium sp.8m和Aspergillus sp.86b產(chǎn)復(fù)合酶活性相對較高。

6、　　(3)利用搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)產(chǎn)復(fù)合酶菌株Aspergillus sp.86b,研究了培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、起始pH值和接種量對菌株產(chǎn)酶的影響。通過單因素試驗和正交試驗證明,影響菌株Aspergillus sp.86b發(fā)酵產(chǎn)酶因素的主次順序為培養(yǎng)時間、接種量、培養(yǎng)溫度和起始pH值;確定了該真菌菌株產(chǎn)復(fù)合酶的最佳發(fā)酵條件為:培養(yǎng)溫度28℃、培養(yǎng)時間3d、起始pH值6.5、接種量6%。
　　通過本研究證明南海局部海洋沉積物中的海洋真菌資源豐