膠州灣細菌多樣性及抗性細菌種類及其抗性基因的分子生物學研究.pdf

1、山東師范大學碩士學位論文膠州灣細菌多樣性及抗性細菌種類及其抗性基因的分子生物學研究姓名：任晶申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：安利國;宋林生20060501山東師范大學碩士學位論文摘要我們利用D A P I 染色熒光顯微鏡技術和微生物培養(yǎng)的方法分析2 0 0 4 年9 月和1 0 月兩個月份膠州灣海水樣品中的總微生物和可培養(yǎng)細菌的數(shù)量和分布特征。D A P I染色熒光的計數(shù)結果顯示總微生物數(shù)量為1 0 6 _ 1 0 7c e

2、 l l s ／m l ，與世界上其它位于溫帶地區(qū)的半封閉性海灣微生物數(shù)量的研究結果相似。其中微生物密度最高( 1 0 V ／m 1 )的區(qū)域分布于膠州灣東北部婁山河和李村河河口及紅島漁業(yè)養(yǎng)殖區(qū)附近。這些區(qū)域的可培養(yǎng)細菌密度在整個膠州灣中也是最高，最高的站位( A S 站，李村河口附近)達到5 ．1 6 ×1 0 S ／m l 。因此，污染類型和程度以及地理和水文學特征是決定膠十t , i 灣微生物數(shù)量和分布的重要因素。通過T

3、 - R F L F 分子生物學方法和聚類分析方法研究膠州灣水體的微生物群落結構特征，可將膠州灣內外的細菌群落分為3 組，膠州灣灣口及灣外的D 1 ，D 3 ，D 5 ，D 6 ，D 7 站位被劃分為一組，其細菌群落更接近于受到灣外海水環(huán)境影響的細菌群落特征；位于膠州灣最內側的站位，如A 3 ，A 5 ，B 2 ，Y 1 被劃為一組，代表膠州灣的“土著”細菌群落；C 1 ，C 3 ，C 4 站位則代表著介于二者之間的過渡性細菌群落。而同

4、時進行的膠州灣光合細菌群落結構的T - R F L P 分析未見其與地理分布和環(huán)境有明顯相關關系?？剐约毦姆植己蛿?shù)量主要受到水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用，以及生活和工業(yè)污水排放狀況的影響，是自然水體環(huán)境的重要水質標準之一。對自然水體中的抗性細菌及其抗性基因的研究不僅對漁業(yè)養(yǎng)殖具有重要的意義而且還直接關系到人類的公共衛(wèi)生健康。膠州灣土霉素和氯霉素抗性細菌密度最高的區(qū)域均位于A 5 站，李村河口附近，說明環(huán)境是影響和決定抗性細菌分布和數(shù)量的重

5、要因素。通過對抗性細菌1 6 Sr D N A 序列分析和系統(tǒng)進化樹的構建，膠州灣內的大部分抗生素抗性細菌屬于Y 一蛋白菌亞綱( 7 - P r o t e o b a c t e r i a ) ，其中氯霉素抗性細菌則表現(xiàn)出非常明顯的假單胞菌屬( P s e u d o m o n a ss p ．) 細菌優(yōu)勢。多重P C R 方法分析膠州灣抗性細菌中土霉素抗性基因．t e t 基因和氯霉素抗性基因．c a t 基因的分布特征。在對8

6、 4 株土霉素抗性基因的分析中，所有六種t e t 基因型．t e t A , t e t B ，t e t C ，t e t D ，t e t E 和t e t G 撼J 被檢測到，其中含量最高的是t e t A ( 3 0 ．6 ％) ，t e t B ( 2 4 5 ％) ，和把t G ( 3 6 ．7 ％) 。在對6 0 株氯霉素抗性基因的分析中，僅有1 2 株氯霉素抗性細菌被檢測到攜帶有c 口崖因，且只包括∞r I 和c a