AtMYB2轉(zhuǎn)錄因子與CMO基因啟動子相互作用的研究.pdf

1、膽堿單加氧酶(CMO)是植物體內(nèi)膽堿合成甜菜堿過程中的關(guān)鍵酶。甜菜堿是一種非毒性的滲透調(diào)節(jié)劑，在植物耐鹽中起著重要的作用。CMO基因受鹽誘導(dǎo)表達(dá)，隨著環(huán)境中鹽濃度的提高，其基因表達(dá)量增加，CMO基因的誘導(dǎo)表達(dá)與其啟動子(pC：-267～+1 bp)有關(guān)。AtMYB2轉(zhuǎn)錄因子是一個受ABA和脫水誘導(dǎo)表達(dá)的MYB家族蛋白，它能與-CTAACCA-位點結(jié)合，促進(jìn)下游基因的表達(dá)。pC序列上含有一個AtMYB2轉(zhuǎn)錄因子的識別位點。本文對AtMYB

2、2轉(zhuǎn)錄因子和CMO基因啟動子之間的相互作用進(jìn)行研究，從而分析CMO基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。
　　 本研究克隆了擬南芥的AtMYB2基因，并將該基因轉(zhuǎn)入已含有pC的煙草中，對轉(zhuǎn)基因煙草的GUS活性進(jìn)行了組織化學(xué)染色及熒光定量分析分析，主要結(jié)果包括：①用RT-PCR技術(shù)獲得了擬南芥AtMYB2基因編碼區(qū)，該編碼區(qū)長822bp，編碼一個由273個氨基酸組成的多肽。將獲得的AtMYB2基因構(gòu)建克隆載體pUC19-AtMYB2,凍融法導(dǎo)入大腸

3、桿菌感受態(tài)細(xì)胞：DH5a，得到EColi-pUC19-AtMYB2；②構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI121-AtMYB2,導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumfaciens)LBA4404，獲得工程菌LBA4404-pBI121-AtMYB2；③采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法將AtMYB2基因?qū)朕D(zhuǎn)pC煙草，獲得具有卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)雙價基因煙草，PCR檢測獲得陽性植株。RT-PCR檢測表明，AtMYB2基因已在轉(zhuǎn)基因煙草中表達(dá)，GUS組