FaDREB1轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及其轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、※瓣鬻沈陽農(nóng)業(yè)大學顧士學位論義摘要干翠、鹽堿及低潞是影響植物生長和農(nóng)作物產(chǎn)量的三種主要的非生物脅迫因子。提高農(nóng)作物的抗逆性，以道應(yīng)日益增長的世界人口對糧食的需求，是妥茲農(nóng)照發(fā)震豹重大漂題之一。鼷羹黃為￡，鴦效抗遂基灝瓣分離與鑒定仍然是農(nóng)作物抗遵基閔工程的主要限制因子。植物中與低溫、干旱和高鹽脅迫應(yīng)答有關(guān)的基因，它們的啟動子區(qū)域中餐含毒孩，玉旁舞為CCGAC靜鬏式疆接元俸，稼兔DRE(dehydrationresponsiveelemen

2、t)。DREB(DREbindingprotein)蹩一種特異性轉(zhuǎn)錄因子，椴物在低瀨、干旱及高赫逆境脅迫下，DREB基因被誘導表達，然后表達產(chǎn)物與DRE黲舅縫臺，在轉(zhuǎn)錄拳平穗麓下游與撬遞瞧穗關(guān)靜多個秘藐基因魏表達，最終使植物的抗邋性得到提離。因此，DREB類轉(zhuǎn)錄因子能夠綜合改隨植物的抗逆性狀，是迄今為止較為理想豹抗逆工程基因。零l麓cDNA泰藕懿俠速擴璦(rapidamplificationofeDNAends，RACE)技術(shù)，從4℃低

3、溫脅迫誘導的草坪萆高羊茅(Festucaarundinacea)中，首次成功克塍到DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因的全長eDNA序列，命名為FaDREBl。該摩殘食鴦一令完整瓣ORF，彥碟全長988bp；縭羈216令懿整酸，窘鴦一段核定位信號(NLS)區(qū)、酸性活化區(qū)域(AAR)和60個氨基黢左右的DNA結(jié)合域(EREBP／AP2)。屬于EREBp／AP2基因家族。敬磷究基因瓣魂熬與應(yīng)震受羹濾，姨FaDREBl基囂豹淡歉表達、趣黧表達、誘導表達以及

4、與對rd29A啟動子的誘導網(wǎng)個角度，成功的構(gòu)建了四個植物表達載體：pART27一FaDREBl①FaDREBl②、p3301B112135sFaDREBl、p3301一Btl21rd29A—FaDREBl、pBll21LFaDREBlrd29A并褥建了pBll21LFaDREBlrd29A的對照載體pBll21Lrd29A。聚用凍融法，將以上五個植物表達載體成功的轉(zhuǎn)入掇癌農(nóng)桿菌LBA4404中。蕾次蔫辯醴i戇方法來譴DREB類轉(zhuǎn)錄因予蒸