絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥中藥用藥規(guī)律及仙茅苷促成骨機制探討.pdf

1、目的:
　　1.研究臨床上治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的中藥內(nèi)服用藥規(guī)律。
　　2.探討仙茅苷的促成骨作用機制。
　　方法:
　　1.以納入標準及排除標準作為篩選準則，將所符合的中醫(yī)內(nèi)服藥治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的臨床文獻進行整理，將整理好的中藥數(shù)據(jù)輸入ECXEL2010軟件中。每一篇文獻為一條記錄，分別錄入文獻的來源出處、第一作者以及列舉出每首中藥復(fù)方里的單味藥藥名和用藥劑量，劑量單位統(tǒng)一為克。根據(jù)衛(wèi)生部“十二五”

2、規(guī)范教材《中藥學》及2010年出版的《中華人民共和國藥典》將藥材名規(guī)范化，統(tǒng)一規(guī)范所建立的中藥數(shù)據(jù)庫中的中藥名稱。將上述篩選后的方劑錄入ECXEL2010建立一個新的中藥數(shù)據(jù)庫，采用頻數(shù)分析方法，計算每味藥物的使用頻次和藥物的種類。對文獻中使用頻次包括10次或10次以上的藥物，根據(jù)藥物主要功效進行聚類分析。
　　2.首先復(fù)蘇UMR106細胞，培養(yǎng)于含雙抗及10％胎牛血清的培養(yǎng)基中，置于37℃、5％C02的恒溫箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長

3、狀況約2-3天換液一次;將生長于對數(shù)期的細胞接種到96孔板中，使用MTT法繪制細胞的生長曲線;鏡下觀察細胞形態(tài)，茜素紅染色對細胞進行礦化鑒定;將對數(shù)期的細胞分別培養(yǎng)，分為7組:空白對照組、雌激素組、高劑量仙茅苷組、低劑量仙茅苷組、雌激素+抑制劑組、高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅昔+抑制劑組;將每組相對應(yīng)的藥物干預(yù)細胞，記錄細胞增殖情況;分別檢測藥物干預(yù)后24h、48h、72h的ALP的活性，干預(yù)后4天和8天BGP的濃度;將對數(shù)期的細

4、胞分別培養(yǎng)，分為四組:空白對照組、雌二醇組、低劑量仙茅苷組、高劑量仙茅苷組，westernblot分別檢測藥物干預(yù)后UMR106細胞ERα和ERβ蛋白的表達。
　　結(jié)果:
　　1.數(shù)據(jù)挖掘研究:提取數(shù)據(jù)中共13個類別，138味中藥，使用頻次共1773次;其中使用頻數(shù)大于等于10次的藥物有8個類別，41味中藥，使用頻次共1521次。常用藥物種類為補益類中藥，其中一線藥物主要為補腎藥物，且以補腎陽藥物為主。此外，其他一線藥物還具

5、有培補肝腎、養(yǎng)陰益髓、健脾益氣、活血化瘀的功效。二線藥物除補益類藥物外，還有祛風濕強筋骨、補腎健脾、清熱活血、安神、解表等功效。仙茅為一線用藥，功效為溫腎壯陽，培補肝腎。
　　2.基礎(chǔ)實驗研究:①24h、48h、72h細胞增殖結(jié)果:與空白對照組比較，雌激素組、高劑量仙茅苷組與低劑量仙茅苷組的細胞增殖均顯著增高(P＜0.01)，雌激素+抑制劑組、高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組的細胞增殖無顯著差異(P＞0.05)。與雌

6、激素組比較，高劑量仙茅苷組的細胞增殖顯著增高(P＜0.01)，低劑量仙茅苷組的細胞增殖無顯著差異(P＞0.05)，雌激素+抑制劑組的細胞增殖顯著降低(P＜0.01)。與高劑量仙茅苷組相比，低劑量仙茅苷組和高劑量仙茅苷+抑制劑組的細胞增殖顯著降低(P＜0.01)。與低劑量仙茅苷組比較，低劑量仙茅苷+抑制劑組的細胞增殖顯著降低(P＜0.01)。與雌激素+抑制劑組比較，高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組的細胞增殖無顯著差異(P＞0

7、.05)。與高劑量仙茅苷+抑制劑組比較，低劑量仙茅苷+抑制劑組的增殖無顯著差異(P＞0.05)。②24h、48h、72h ALP活性結(jié)果:與空白對照組比較，雌激素組、高劑量仙茅苷組與低劑量仙茅苷組的ALP活性均顯著增高(P＜0.01)，雌激素+抑制劑組、高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組的ALP活性無顯著差異(P＞0.05)。與雌激素組比較，高劑量仙茅苷組的ALP活性顯著增高(P＜0.01)，低劑量仙茅苷組的ALP活性無顯著

8、差異(P＞0.05)，雌激素+抑制劑組的ALP活性顯著降低(P＜0.01)。與高劑量仙茅苷組相比，低劑量仙茅苷組和高劑量仙茅苷+抑制劑組的ALP活性顯著降低(P＜0.01)。與低劑量仙茅苷組比較，低劑量仙茅苷+抑制劑組的ALP活性顯著降低(P＜0.01)。與雌激素+抑制劑組比較，高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組的ALP活性無顯著差異(P＞0.05)。③BGP4d、8d的濃度:與空白對照組相比，雌激素組、高劑量仙茅苷組、低劑

9、量仙茅苷組、高劑量仙茅苷+抑制劑組的BGP分泌量均顯著增高(P＜0.01或P＜0.05)，而雌激素+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組與空白對照組相比則無差異(P＞0.05)。雌激素組BGP分泌量顯著高于雌激素+抑制劑組(P＜0.05);高劑量仙茅苷組BGP的分泌量則高于雌激素組、低劑量仙茅苷組、高劑量仙茅苷+抑制劑組(P＜0.01)。低劑量仙茅苷組BGP分泌量與雌激素組無明顯差異(P＞0.05);但顯著高于低劑量仙茅苷+抑制劑組(P＜0

10、.01)。高劑量仙茅苷+抑制劑組BGP的分泌量高于雌激素+抑制劑組、低劑量仙茅昔+抑制劑組(P＜0.05)。雌激素+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組之間無差異(P＞0.05)。④高劑量仙茅苷組ERα的蛋白表達高于空白對照組(P＜0.05)，而雌激素組、低劑量組和空白組之間無明顯差異(P＞0.05);各組之間ERβ蛋白的表達差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　1.描述性分析及聚類分析結(jié)果一致，其中一線藥物主要為補腎藥物，且以補