“鐵蓄積”在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(Ⅰ型)中作用機制的相關(guān)研究.pdf

1、第一部分“鐵蓄積”對去勢前后小鼠骨代謝的影響及相關(guān)機制
　　目的：觀察雌激素的有無對鐵蓄積小鼠骨量、骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)及氧化應(yīng)激的影響。
　　方法：建立高鐵小鼠模型，將小鼠隨機分為對照組（con組）、高鐵組（F組）、去勢組（OVX組）、高鐵去勢組（F+OVX組）。con組及OVX組注射生理鹽水，余兩組注射枸櫞酸鐵胺（FAC），8周后檢測小鼠體重，對肝臟及股骨遠端行普魯士藍鐵染色，ELISA檢測血清Fer、ALP、osteocalci

2、n、CTX、TRAP-5b、MDA、SOD；股骨遠端Micro-CT三維分析，提取各組小鼠股骨骨髓細(xì)胞進行破骨細(xì)胞培養(yǎng)，抗酒石酸酸性磷酸酶染色觀察破骨細(xì)胞分化。
　　結(jié)果：各組小鼠體重?zé)o明顯差異。F組及F+OVX組血清鐵蛋白含量明顯升高（P<0.05），且肝臟及股骨遠端鐵染色著色明顯。ELISA結(jié)果示：未去勢（雌激素存在）的F組與con組相比，CTX、TRAP-5b、MDA、SOD組間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P均>0.05），F(xiàn)組ALP

3、及osteocalcin表達量較con組明顯降低（P均<0.05）；而去勢的兩組相比，鐵劑干預(yù)后，MDA、TRAP-5b、CTX明顯升高（P均>0.05），SOD、ALP、osteocalcin則降低（P均>0.05）。Micro-CT分析表明：雌激素存在時，對照組與鐵干預(yù)組骨密度及相關(guān)指標(biāo)無明顯差異（P>0.05）；雌激素缺乏時，與OVX組比較，F(xiàn)+OVX組骨量下降更為嚴(yán)重（P<0.05）。TRAP染色顯示去勢前各組小鼠破骨細(xì)胞數(shù)無明

4、顯差異（P>0.05）；而去勢后，F(xiàn)+OVX組破骨細(xì)胞數(shù)明顯高于OVX組（P<0.05）。
　　結(jié)論：未去勢時（有雌激素），F(xiàn)AC對骨量、骨吸收影響甚微；去勢后（無雌激素），F(xiàn)AC能顯著增強破骨活性，使骨量下降。雌激素與鐵對骨代謝的該種拮抗作用與骨形成無關(guān)，而僅與骨吸收相關(guān)。
　　第二部分鐵與雌二醇的聯(lián)合作用對成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞生物活性的影響及相關(guān)機制
　　目的：研究成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞在鐵與雌二醇的共同干預(yù)下，各自生物

5、活性指標(biāo)變化，并探討NF-κB通路在其中的作用。
　　方法：1、成骨細(xì)胞選取小鼠顱骨原代細(xì)胞，分為對照組，F(xiàn)AC組、E2組、FAC+E2組，各組用相應(yīng)的10μM枸櫞酸鐵胺（FAC）及10nM雌二醇（E2）干預(yù)，3d后行堿性磷酸酶（ALP）染色，10d后取培養(yǎng)基上清檢測ALP活性；熒光定量PCR（q-PCR）檢測成骨相關(guān)基因差異。2、破骨細(xì)胞選取細(xì)胞系RAW264.7，分組同成骨細(xì)胞，以50μM FAC及10nM E2干預(yù)，TRAP

6、染色及噬骨陷窩實驗檢測破骨細(xì)胞分化差異，q-PCR檢測破骨相關(guān)基因差異；熒光酶標(biāo)儀檢測成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞活性氧水平。提取破骨細(xì)胞胞漿及胞核蛋白，Western-Blot檢測NF-κB通路相關(guān)蛋白表達量的差異。
　　結(jié)果：1、成骨細(xì)胞ALP檢測結(jié)果示，無論有無雌二醇，F(xiàn)AC均能抑制成骨細(xì)胞ALP活性，基因水平上，F(xiàn)AC顯著下調(diào)SP7、Runx2基因表達水平（P均<0.05），該下調(diào)作用與雌激素?zé)o關(guān)。2、破骨細(xì)胞TRAP染色結(jié)果示：F

7、AC能顯著增加TRAP染色陽性細(xì)胞數(shù)（P<0.05），而當(dāng)雌二醇存在時，該作用被抑制。噬骨陷窩實驗結(jié)果與之一致。q-PCR結(jié)果：無雌二醇干預(yù)時，鐵劑能顯著上調(diào)MMP9、Acp5、Ctsk、Calcr基因表達水平（P均<0.05），雌二醇存在時，兩組基因表達無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P均>0.05）。活性氧ROS檢測結(jié)果：在成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞中，F(xiàn)AC均能增加ROS活性（P均<0.05），而雌二醇則能下調(diào)活性氧水平（P均<0.05）。蛋白水平上，