肝臟NK細(xì)胞對梗阻性黃疸小鼠模型急性肝損傷及肝纖維化的影響.pdf

1、前言：梗阻性黃疸（obstructive jaundice，OJ）是臨床上常見病理狀態(tài)，主要導(dǎo)致肝臟損傷，隨著梗阻時(shí)間延長,肝臟最終發(fā)展為膽汁淤積性肝硬化。目前對梗阻性黃疸急性肝損傷及肝纖維化治療措施有限，因此研究其肝損傷的發(fā)病機(jī)制對治療有重要意義。自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞在肝臟中含量豐富，是肝臟免疫的第一道防線。相比外周血液中的NK細(xì)胞，肝臟NK細(xì)胞除了固有免疫功能外還有特殊的功能，很多研究發(fā)現(xiàn)肝臟NK細(xì)胞在

2、多種肝臟疾病中功能失調(diào)并參與肝臟疾病肝損傷。研究證實(shí)活化的NK細(xì)胞可通過直接殺傷肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）及通過產(chǎn)生細(xì)胞因子IFN-γ抑制肝纖維化。目前關(guān)于肝臟NK細(xì)胞在梗阻性黃疸肝損傷及肝纖維化中的作用研究較少。
　　目的：通過構(gòu)建梗阻性黃疸小鼠模型，研究肝臟NK細(xì)胞對梗阻性黃疸小鼠模型急性肝損傷及肝纖維化的影響，并初步探討其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：小鼠隨機(jī)分為4組，每組40只，A組：手

3、術(shù)+Poly I:C組、B組：手術(shù)+PBS組、C組：假手術(shù)+Poly I:C組、D組：假手術(shù)+PBS組。手術(shù)組行膽總管雙重結(jié)扎術(shù)（bile duct ligation，BDL）構(gòu)建梗阻性黃疸模型，假手術(shù)組僅游離膽總管。A、C組腹腔注射聚肌胞（Poly I:C）誘導(dǎo)NK細(xì)胞肝內(nèi)活化及聚集，B、D組注射等量磷酸鹽緩沖液（PBS）作為對照。于第7天及第14天兩個(gè)時(shí)相取各組小鼠血液及肝臟標(biāo)本，比較各組小鼠血清肝功能各指標(biāo)、肝組織HE染色、Mas

4、son三染色、NF-κB免疫染色、α-SMA免疫染色及實(shí)時(shí)熒光定量聚合鏈反應(yīng)檢測肝臟NK細(xì)胞表面特異性標(biāo)志NK1.1、腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）、NF-κB、α-SMA及腫瘤壞死因子（TNF）-α mRNA表達(dá)量變化，觀察梗阻性黃疸模型病理生理過程，對比各組急性肝損傷及肝纖維化的程度，探究肝臟NK細(xì)胞及與急性肝損傷及肝纖維化的關(guān)系。
　　結(jié)果；膽總管結(jié)扎術(shù)成功構(gòu)建了小鼠梗阻性黃疸模型，術(shù)后第7天以急性肝損傷為主要表

5、現(xiàn)，血清肝功能指標(biāo)升高，肝質(zhì)比升高，肝臟呈淤膽表現(xiàn)，肝臟出現(xiàn)大量片狀壞死，Kuffer細(xì)胞活化產(chǎn)生大量TNF-α，NF-κB活化增多，NK1.1、TRAIL mRNA表達(dá)增多。第14天模型組小鼠肝臟肝損傷加重，并出現(xiàn)明顯的肝硬化表現(xiàn)，同時(shí)，第14天肝臟NK1.1陽性細(xì)胞及TRAIL表達(dá)較第7天增多，與肝損傷呈正相關(guān)，推斷NK細(xì)胞出現(xiàn)免疫紊亂，NK細(xì)胞可能參與梗阻性黃疸肝損傷。與PBS對照組比較，Poly I:C干預(yù)組肝臟NK細(xì)胞數(shù)量增多

6、，表明Poly I:C成功誘導(dǎo)NK細(xì)胞肝內(nèi)聚集；手術(shù)組A組和B組比較，第7天肝功能指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST） A組較B組升高，HE染色肝細(xì)胞壞死面積A組較B組增大，NF-κB及TNF-α表達(dá)增高，TRAIL表達(dá)增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；第14血清肝功能AST、ALT及TNF-α表達(dá)A組較B組高，HE染色、Masson染色結(jié)果表明A組較B組肝纖維化程度重，肝臟α-SMA表達(dá)A組較B組增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義（P＜0.05）。假手術(shù)組C組和D組比較，第7天及第14天血清肝功能指標(biāo)、HE染色、Masson三染色及NF-κB、TNF-α、α-SMA、TRAIL的表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：⑴小鼠模型中，肝臟NK細(xì)胞含量增多，并與肝損傷嚴(yán)重程度相關(guān)，提示梗阻性黃疸伴隨著肝臟NK細(xì)胞細(xì)胞免疫功能紊亂。⑵Poly I:C誘導(dǎo)肝臟NK細(xì)胞活化與聚集，加重梗阻性黃疸急性肝損傷，肝臟NK細(xì)胞可能通過TRAIL途徑參與梗阻性黃疸急