膽汁酸對(duì)不同引流方式下梗阻性黃疸大鼠部分肝切除后肝細(xì)胞凋亡及再生的影響.pdf

1、一、背景與目的:
　　肝門部膽管癌（HC，Hilar Cholangiocarcinoma）是肝膽外科治療的難題之一，且患病率有逐年升高的趨勢(shì)?；颊叽蠖鄶?shù)伴有嚴(yán)重的梗阻性黃疸（梗黃，Obstructive jaundice，OJ），梗黃患者感染、發(fā)熱、敗血癥和營(yíng)養(yǎng)不良等術(shù)后并發(fā)癥較多，患者大部分肝切除術(shù)后極易出現(xiàn)肝功能衰竭而導(dǎo)致死亡。研究表明，對(duì)梗黃患者行術(shù)前膽道引流是十分必要的。我們前期的研究證實(shí)外引流對(duì)梗阻性黃疸大鼠部分肝切除

2、術(shù)后殘肝再生較內(nèi)引流有明顯抑制作用，其中原因及機(jī)制尚不清楚。而內(nèi)外引流的主要差別就在于膽汁是否能夠進(jìn)入腸道。因此，膽汁酸的作用可能是不同引流方式部分肝切除后肝再生差異的主要原因之一。膽汁酸是膽汁中一類膽烷酸的總稱，有調(diào)節(jié)膽酸代謝、能量代謝以及抑制腸道細(xì)菌過(guò)度增殖等作用。是否膽汁酸通過(guò)影響肝細(xì)胞凋亡從而影響肝再生？本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較外源性膽汁酸干預(yù)的不同引流方式下梗黃大鼠部分肝切后肝功能、肝再生率、有絲分裂指數(shù)、血總膽紅素濃度、血漿膽汁酸水平

3、、肝細(xì)胞凋亡指數(shù)和Bax及Bcl-2表達(dá)的差異，進(jìn)一步探討膽汁酸干預(yù)的不同引流方式下肝細(xì)胞凋亡及再生差異的機(jī)制。
　　二、材料與方法:
　　采用成年雄性SD大鼠50只，隨機(jī)分成五組，即梗阻性黃疽組(OJ，n=10)、膽汁內(nèi)引流組(ID，n=10)，膽汁外引流組(ED，n=10)，膽汁酸外引流+0.2％CA組(ED+CA，n=10)和假手術(shù)組(SH，n=10)。采用膽總管雙重結(jié)扎剪斷的方法制作大鼠梗阻性黃疸動(dòng)物模型，梗阻7天后

4、分組行不同方式膽道引流，膽汁酸外引流+0.2％CA組予外源性膽汁酸灌胃，引流7天后行70％部分肝切除術(shù)，建立梗阻性黃疸不同引流方式減黃70％部分肝切除SD大鼠動(dòng)物模型。并在術(shù)后72h收集大鼠血液及肝臟組織標(biāo)本。生化分析儀檢測(cè)肝功能，測(cè)定肝再生率，免疫組化法觀察肝臟組織PCNA表達(dá)、有絲分裂指數(shù)，ELISA試劑盒檢測(cè)總膽汁酸水平，TUNEL法測(cè)定肝細(xì)胞凋亡指數(shù)，免疫組化法觀察肝臟Bax及Bcl-2表達(dá)。
　　三、結(jié)果:
　　(

5、1)PH術(shù)后ID組及ED+CA組死亡率和SH組相當(dāng)，較ED組、OJ組明顯偏低。(2)PH后72h肝再生率、PCNA、有絲分裂指數(shù)，ID組高于ED組(P＜0.05)，ED組又高于OJ組(P＜0.05)，ID組和ED+CA組及SH組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(3)OJ組膽汁酸水平明顯高于其他各組(P＜0.01)，PH后72小時(shí)OJ組膽汁酸水平最高，ID組高于ED組(P＜0.05)，ID組和ED+CA組及SH組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0

6、.05)。(4)OJ組大鼠凋亡細(xì)胞明顯增加，SH組僅見(jiàn)少量細(xì)胞凋亡，ID組、ED+CA組、ED組凋亡指數(shù)依次上升，OJ組、ID組、ED組、SH組凋亡指數(shù)互相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。ID組與ED+CA組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(5)OJ組和ED組Bax表達(dá)量明顯增加，且ED組的表達(dá)量低于OJ組，(P＜0.05)，OJ組、ID組、ED組、SH組互相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。Bax表達(dá)與凋亡指數(shù)一致。ID組及ED+CA組Bcl-

7、2表達(dá)增加，與SH組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。ID組與ED+CA組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　四、結(jié)論:
　　1.內(nèi)外引流術(shù)均可解除膽道梗阻，但更符合生理的內(nèi)引流PH術(shù)后肝再生明顯優(yōu)于外引流和未引流，外引流術(shù)對(duì)肝再生有明顯的抑制。
　　2.外引流術(shù)相對(duì)內(nèi)引流術(shù)后導(dǎo)致的肝再生差異可能是由于膽汁酸腸肝循環(huán)破壞，使肝細(xì)胞凋亡增加，進(jìn)而影響了肝再生。
　　3.外引流加外源性膽汁酸干預(yù)可以達(dá)到與內(nèi)引流基本相同的效果，為臨