白喉烏頭及其炮制品抗類(lèi)風(fēng)濕活性及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究白喉烏頭不同炮制品、單體的體內(nèi)外抗類(lèi)風(fēng)濕活性及作用機(jī)制，尋找活性單體成分，優(yōu)選炮制方法，為其進(jìn)一步研究及臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1.建立SD大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型：(1)應(yīng)用足趾容積測(cè)量?jī)x檢測(cè)致炎前和致炎后第7、14、21、28天大鼠致炎側(cè)的足趾容積，以關(guān)節(jié)腫脹度的大小為評(píng)判依據(jù)；（2）通過(guò)拍攝X光片，觀察其骨性變化，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行評(píng)分；(3)應(yīng)用HE染色觀察SD大鼠滑膜組織的病理學(xué)改變，并進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分；(4)采用

2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測(cè)定血清中C反應(yīng)蛋白（CRP）、類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）、皮質(zhì)醇（Hydrocortisone）的表達(dá)水平；2.體外培養(yǎng)人類(lèi)風(fēng)濕成纖維樣滑膜細(xì)胞（HFLS-RA）：(1)采用CCK8法檢測(cè)白喉烏頭及其炮制品和主要單體對(duì)HFLS-RA細(xì)胞的增殖抑制程度；(2)運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)該藥物對(duì)細(xì)胞凋亡及周期的影響；(3)運(yùn)用RT-PCR法及Western blot法檢測(cè)不同藥物干預(yù)后，HFLS-RA細(xì)胞株中TLR4、HI

3、F-1-alpha、VEGF的mRNA和蛋白表達(dá)水平；(4)通過(guò)ELISA法檢測(cè)上述細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子的表達(dá)水平。 結(jié)果：1.體內(nèi)抗類(lèi)風(fēng)濕活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；(1)造模7天后，與空白對(duì)照組相比，其他組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度顯著增加（P<0.05）；隨著給藥天數(shù)的增加，除模型組外，其他各給藥組關(guān)節(jié)腫脹度顯著降低（P<0.05）,其中以加輔料共煮法高劑量組腫脹度下降最明顯(P<0.01)；(2)X光片結(jié)果，與

4、空白對(duì)照組比較，模型組關(guān)節(jié)炎大鼠軟組織腫脹明顯，關(guān)節(jié)間隙狹窄甚至消失，關(guān)節(jié)面模糊；各給藥組與模型組相比，上述病變癥狀較輕；各給藥組間相比，病變程度亦有差異，但同一組不同劑量間無(wú)明顯差異；(3)病理學(xué)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，模型組滑膜細(xì)胞過(guò)度增生，關(guān)節(jié)間隙狹窄甚至消失；與模型組相比，只有加輔料共煮法具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；各給藥組相比，加輔料共煮法與高壓蒸法中劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(4)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，模型組Hydroc

5、ortisone水平降低，CRP水平升高；與模型組比較，Hydrocortisone水平升高、CRP水平降低（P<0.05）；各藥物間比較，CRP水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且加輔料共煮法高劑量組與其他藥物組間存在差異（P<0.05）；2.體外抗類(lèi)風(fēng)濕活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)細(xì)胞增殖抑制率檢測(cè)結(jié)果顯示，各藥物組對(duì)HFLS-RA細(xì)胞的增殖均有一定的抑制作用，其中以加輔料共煮法炮制品在相同濃度下干預(yù)48h后對(duì)該細(xì)胞的增殖抑制程度最高；(2)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯

6、示，與空白對(duì)照組（HFLS-RA細(xì)胞）比較，其他各給藥組的總凋亡率均明顯上調(diào)（P<0.05）；細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，其他組進(jìn)行藥物干預(yù)后，G0/G1期細(xì)胞數(shù)目明顯減少（P<0.05）；(3)RT-PCR法與Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，藥物干預(yù)后，TLR4、HIF-1-alpha、VEGF mRNA及蛋白表達(dá)均有不同程度的下調(diào)，只是VEGF mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；(4)ELISA檢測(cè)

7、結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，其他給藥組炎性因子 IL-6、IL-1β、TNF-α的表達(dá)均下調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.白喉烏頭及其炮制品對(duì)佐劑致類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠有不同程度的治療作用，且以加輔料共煮的方法制備的炮制品在治療RA方面效果較顯著。
　　2.白喉烏頭及其炮制品和分離的單體成分在體外均有一定的抗類(lèi)風(fēng)濕活性，尤以單體1（delvestidine）和單體4（氨茴酰牛扁堿）效果較明顯。推測(cè)其抗類(lèi)風(fēng)濕作用機(jī)制可能是通