傣藥帕崩板治療慢性酒精性肝病的作用機制研究.pdf

1、長期過量飲酒可導致酒精性脂肪肝，進而發(fā)展為酒精性肝炎、肝纖維化甚至誘發(fā)成肝癌等一系列酒精性肝病（Alcoholic liver disease，ALD）。國內外對其已有大量的研究，但西醫(yī)目前暫無有效治療ALD的藥物。我們的前期工作已經證實了傣藥帕崩板可有效治療急性酒精暴露引起的肝損傷。因此，我們預測帕崩板可治療更為嚴重的慢性酒精性脂肪肝。
　　目的：
　　探究傣藥帕崩板治療慢性酒精性肝病的作用規(guī)律，明確其治療慢性酒精性肝病的

2、物質基礎與分子機制，為臨床治療酒精性肝病提供新思路，豐富傣醫(yī)藥治療酒精性肝病的經驗。
　　方法：
　　1.傣藥帕崩板治療慢性酒精性脂肪肝的研究
　　（1）利用Lieber-DeCarli酒精液體飼料喂養(yǎng)小鼠8周建立慢性酒精性脂肪肝模型。在7-8周給予帕崩板醇提物、60％乙醇洗脫部位（帕崩板醇提物的主要活性部位）、綠原酸（60%乙醇洗脫部位主要成分之一），并選用臨床上的保肝藥物水飛薊素作為陽性對照，分別進行干預。

3、　　（2）在組織學上，評價帕崩板對酒精誘導脂質蓄積的改善情況。本部分檢測了小鼠體重和肝臟指數(shù)，利用H&E和油紅O染色檢測肝組織脂質蓄積情況，并對上述兩種染色進行定量。
　?。?）在血清學上，評價帕崩板對酒精所致異常肝功能的改善情況。檢測小鼠血清中AST、ALT、TCHO、TG、DLC和HDLC等生化指標；利用鱟試劑法檢測小鼠血清內毒素的含量；以 FITC-D4作為檢測腸黏膜通透性的指示劑表征腸粘膜通透性；用頂空氣相色譜法檢測小鼠血

4、酒精濃度。
　?。?）在分子水平上，研究帕崩板治療酒精性肝病的分子機制。利用 RT-PCR法檢測小鼠肝組織中脂肪酸代謝相關因子 SREBP-1c、FASN、ACC和 SCD-1 mRNA等表達量；Western blot法檢測固醇調節(jié)元件結合蛋白-1c（SREBP-1c）及其上游信號MAPKs（p44/42和p38）、AMPK和下游信號ACC的表達和活性。
　　2.帕崩板有效部位協(xié)同改善其中綠原酸腸吸收
　　在前期研究

5、篩選出了帕崩板抗急性酒精性肝病有效部位（active fraction of G. procumbens，AFG，含綠原酸13.4%，對香豆?？崴?.6%）的基礎上，研究其在大鼠腸道的吸收特性。建立大鼠在體單向腸灌流模型，采用重量法檢測三種pH（7.8、6.9、5.5）下的AFG和綠原酸純品在回腸的吸收值，pH7.8時AFG吸收最大，進一步檢測pH7.8時AFG在十二指腸、空腸、結腸的吸收。
　　結果：
　　1.帕崩板醇提

6、物及其有效成分（60%乙醇洗脫部位、綠原酸）可逆轉酒精誘導的小鼠血清肝功能的異常和脂質蓄積情況。在分子水平上，酒精誘導小鼠體內脂肪化合成和氧化相關因子表達增加、MAPK（p44/42和p38）的磷酸化作用降低、SREBP-1c剪切成熟和ACC活性增加。帕崩板醇提物及60%乙醇洗脫部位逆轉酒精誘導的MAPK/SREBP-1c信號通路中蛋白表達水平，恢復脂質代謝因子平衡，治療酒精性脂肪肝；而綠原酸雖可逆轉酒精誘導的ACC等脂質代謝因子失衡，

7、卻沒有改變MAPK/SREBP-1c信號通路中蛋白表達水平。本實驗中各組小鼠體重和炎癥相關因子TNF-α和IL-1βmRNA的表達量均沒有顯著性變化。
　　2.在回腸中，pH5.5時綠原酸純品吸收最大，然而，AFG中的綠原酸在 pH7.8時吸收最大。
　　結論：
　　1.傣藥帕崩板能有效治療慢性酒精性脂肪肝
　　帕崩板通過MAPK/SERBP-1c依賴和非依賴途徑（其中綠原酸是經非依賴性途徑）調節(jié)肝臟脂質代謝相關