吡格列酮治療大鼠非酒精性脂肪肝病及機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)高脂飲食構(gòu)建大鼠非酒精性脂肪肝?。∟AFLD）模型；探討胰島素抵抗（IR）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）、脂肪代謝、炎癥反應(yīng)在NAFLD發(fā)病機(jī)制中的作用；觀察吡格列酮（PIO）治療大鼠NAFLD的療效及對(duì)肝臟JNK1表達(dá)的影響；探討PIO治療NAFLD的作用機(jī)制。 方法：將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常飲食組16只，予以普通飼料喂養(yǎng)；高脂飲食組24只，予以高脂飼料（普通飼料加1％膽固醇和14％豬油）喂養(yǎng)；第8周

2、末兩組隨機(jī)處死8只大鼠鑒定成模，分別為8周正常對(duì)照組（NG8w）和8周高脂模型組（HG8w）。第9周開(kāi)始將高脂飲食組大鼠隨機(jī)分為2組：12周高脂模型組（HG12w）8只，均予以生理鹽水2ml·d-1灌胃4周；吡格列酮組（PG）10只，均予以鹽酸吡格列酮片10mg·kg-1d-1灌胃4周。兩組均繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)4周。每只大鼠處死前隔夜禁食并稱重；經(jīng)門靜脈取血，離心分離血清，用于測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、甘油三

3、酯（TG）、總膽固醇（TC）、空腹血糖（FBS）、血清胰島素（FIns）、游離脂肪酸（FFAs）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）；計(jì)算空腹胰島素抵抗指數(shù)（FIRI）；游離肝臟并稱重，計(jì)算肝指數(shù)；取小塊肝組織剪碎，倒入玻璃勻漿器中勻漿，制成10％的肝組織勻漿，用于測(cè)定肝勻漿FFAs、TG、TC含量；取大鼠肝右葉組織病理切片，HE染色，評(píng)價(jià)肝臟脂肪變性程度。取大鼠肝右葉組織石蠟切片，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)JNK1在肝組織中的表達(dá)。

4、結(jié)果： （1）與同期正常對(duì)照組相比，HG8w和HG12w SD大鼠體重、肝指數(shù)、血清ALT、AST、TG、TC、FIns、FIRI、FFAs、TNF-α水平及肝勻漿TG、TC、FFAs均明顯升高，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而血糖沒(méi)有明顯變化；光鏡下，HG8w大鼠肝臟出現(xiàn)空泡樣脂肪變性，HG12w大鼠肝臟空泡樣脂肪變性呈彌漫性，伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)甚至點(diǎn)狀壞死； （2）PG組大鼠的肝指數(shù)、血清ALT、AST、TG、FIns、FIRI、

5、FFAs、TNF-α水平及肝勻漿TG、FFAs均低于HG12w組，但仍高于NG12W，比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；PG組大鼠肝臟HE染色肝組織切片，光鏡下觀察肝小葉內(nèi)可見(jiàn)肝細(xì)胞呈大泡性脂肪變性及氣球樣變，脂肪變性程度較HG12w減輕，偶見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)無(wú)點(diǎn)狀壞死； （3）JNK1蛋白免疫組織化學(xué)顯示：光鏡下觀察，NG組大鼠肝組織未見(jiàn)明顯JNK1抗體陽(yáng)性細(xì)胞；HG8w、HG12w大鼠肝臟則有較強(qiáng)的JNK1表達(dá)，表現(xiàn)為細(xì)胞漿和/或細(xì)胞核內(nèi)彌漫

6、性棕黃色或棕褐色顆粒。免疫組化評(píng)分與NG組大鼠相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； PG大鼠的肝臟JNK1表達(dá)較HG12W弱，表現(xiàn)為陽(yáng)性顆粒的著色程度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均較少，但較NG12W表達(dá)仍高，比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； （4）FIRI分別與肝臟脂肪變性及TNF-α、FFAs、JNK1表達(dá)水平之間均呈正相關(guān)；TNF-α、 FFAs與JNK1表達(dá)水平之間均呈正相關(guān)。 結(jié)論： 1.SD大鼠持續(xù)高脂飲食喂養(yǎng)8周成功構(gòu)建了NAFLD模型。