輔助性T細(xì)胞17在酒精性肝病中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:長期飲酒所引起的酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)已經(jīng)成為我國人群慢性肝臟疾病的一個(gè)重要病因。輔助性T細(xì)胞17(helper T cells17，Th17)是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)CD4+T細(xì)胞亞群，在多種免疫相關(guān)性疾病中激活并通過招募相應(yīng)免疫細(xì)胞和分泌相關(guān)細(xì)胞因子(主要是IL-17)等方式發(fā)揮作用。本研究旨在通過改良小鼠胃造瘺模型研究Th17及其相關(guān)細(xì)胞因子在ALD發(fā)生發(fā)展中的作用，并闡述其機(jī)制。

2、>　　方法:本研究使用成年（8周齡，體重20-25 g）雄性ICR小鼠建立改良型小鼠胃造瘺模型并隨機(jī)分為以下幾組:對(duì)照組1(Con)，通過造瘺管生理鹽水灌胃(30ml/kg·天，4周);酒精性肝病組1-3(ALD1-ALD3)，60％酒精灌胃（30 ml/kg·天），時(shí)間分別為4、8、12周;酒精性肝病組4(ALD4)，酒精灌胃采用的方式與時(shí)間與ALD3組相同，第9周開始每周通過尾靜脈分別注射含有1μg抗IL-17抗體的生理鹽水200μ

3、l。每組6只小鼠。建模完成后稱取肝臟重量，計(jì)算肝重/體重比值;并收集各組小鼠血液標(biāo)本及組織標(biāo)本，評(píng)估各組小鼠肝臟組織學(xué)損傷情況，檢測(cè)其肝功能、血漿細(xì)胞因子濃度、Th17細(xì)胞百分比、Th17相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子mRNA濃度，進(jìn)行組織標(biāo)本二維差異凝膠電泳(two-dimensional difference gelelectrophoresis，2D-DIGE)、質(zhì)譜(mass spectrometry，MS)確定差異蛋白并進(jìn)行免疫印跡(weste

4、rn blotting，WB)實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果:肝重/體重比值、肝酶及病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)隨著ALD的進(jìn)展，小鼠肝臟炎癥、壞死的程度逐漸加深，同時(shí)肝臟表現(xiàn)出現(xiàn)進(jìn)行性纖維化。以抗IL-17處理有效減輕酒精灌胃12周小鼠的肝臟壞死和肝硬化水平，注射抗IL-17抗體對(duì)肝功能具有保護(hù)作用。與對(duì)照組相比，除TNF-α外，酒精性肝病組小鼠各細(xì)胞因子在不同時(shí)相出現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高（除IL-23與IL-6的ALD1組外）;而TNF-α在ALD1上升

5、后不同時(shí)相出現(xiàn)下降趨勢(shì)，注射抗IL-17引起IL-1b、IL-10、TNF-α水平明顯升高，而IL-6、IL-17A、IL-23水平明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。慢性酒精灌胃轉(zhuǎn)錄因子Rorγt出現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的升高，且這種升高呈現(xiàn)時(shí)間相關(guān)性;慢性酒精灌胃12周(ALD3)后IL-17、IL-21、IL-23等細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;注射含抗IL-17抗體的生理鹽水抑制以上基因表達(dá)。Th17細(xì)胞百分比隨著ALD的進(jìn)展呈現(xiàn)上升趨

6、勢(shì)，ALD3組各指標(biāo)顯著高于Con組?？笽L-17抗體Th17細(xì)胞百分比下降，表明Th17細(xì)胞的分化受到了抑制。2D-DIGE和MS及WB分析表明碳水化合物反應(yīng)原件結(jié)合蛋白(carbohydrate responseelement binding protein，CHREBP)、山羊固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白1c(sterolregulatory element-binding protein-1c，SREBP-1c)的隨著ALD的進(jìn)展呈現(xiàn)上

7、升趨勢(shì)，烯酰酯輔酶A水合酶1(enoyl-coenzyme Ahydratase，ECHS1)和過氧化物酶增殖子激活受體α(peroxisome proliferator-activated receptorα，PPARα)的表達(dá)隨著ALD的進(jìn)展呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，注射抗IL-17抗體抑制CHREBP、SREBP-1c的表達(dá)，而促進(jìn)ECHS1、PPARα表達(dá)，表明抗IL-17抗體在肝細(xì)胞脂肪代謝過程中發(fā)揮抑制脂肪形成促進(jìn)脂肪代謝的作用，減輕脂