鍶納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合涂膜的合成及封閉牙本質(zhì)小管的作用.pdf

1、背景和目的：牙本質(zhì)敏感癥是一種臨床上的常見(jiàn)病、多發(fā)病，其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，普遍被人們所接受的是流體動(dòng)力學(xué)說(shuō)。根據(jù)流體動(dòng)力學(xué)說(shuō)，通過(guò)物理或化學(xué)手段封閉牙本質(zhì)小管，減少或避免外界刺激引起牙本質(zhì)內(nèi)的液體流動(dòng)是治療牙本質(zhì)敏感癥的重要途徑。目前藥物治療仍然是治療牙本質(zhì)過(guò)敏的常用方法，如含氟涂膜，雖然其已被證實(shí)抗牙本質(zhì)敏感效果，但在口腔中保存時(shí)間短，發(fā)揮抗牙本質(zhì)敏感的作用短。故目前關(guān)于治療牙本質(zhì)敏感的藥物研究重點(diǎn)在對(duì)療效持久性的要求上。葡萄籽提

2、取物原花青素作為一種天然的植物多酚，已被證實(shí)具有抑菌，抑制礦化或促進(jìn)根面齲再礦化以及其與膠原發(fā)生交聯(lián)并保護(hù)膠原的作用；羥基磷灰石是人體骨和牙齒的重要組成成分，納米羥基磷灰石被證實(shí)能有效的封閉牙本質(zhì)小管來(lái)緩解牙本質(zhì)敏感。鍶被認(rèn)為能抑制牙本質(zhì)敏感，而研究證實(shí)摻鍶納米羥基磷灰石也具有強(qiáng)大的吸附作用和抑菌防齲作用。原花青素在口腔抗牙本質(zhì)敏感方面的應(yīng)用研究目前少有報(bào)道，將其與鍶納米羥基磷灰石結(jié)合發(fā)揮作用的報(bào)道尚未發(fā)現(xiàn)。本研究嘗試人工合成鍶納米羥基

3、磷灰石原花青素復(fù)合物并通過(guò)試驗(yàn)探討其對(duì)牙本質(zhì)小管的封閉作用。
　　材料和方法：
　　1.原花青素封閉牙本質(zhì)小管作用研究：在體外環(huán)境，以新鮮拔除的牛下頜切牙制備1cm直徑*1mm厚度牙本質(zhì)標(biāo)本，EDTA溶液+超聲蕩洗部分脫礦，開(kāi)放牙本質(zhì)小管口，隨機(jī)選取其中10塊分為（4mg/ml）原花青素組和空白組，每組5個(gè)標(biāo)本，試驗(yàn)組原花青素處理5分鐘，每天兩次，放入2％牛血清蛋白的SBF溶液中進(jìn)行體外循環(huán)；空白組不處理，僅每天兩次換新鮮配

4、置的2%牛血清蛋白的 SBF溶液。循環(huán)7天后的牙本質(zhì)樣本送檢SEM檢測(cè)并進(jìn)行表面形貌分析，EDX及FTIR檢測(cè)其牙本質(zhì)小管內(nèi)生成物成分，了解原花青素對(duì)牙本質(zhì)的作用。
　　2.鍶納米羥基磷灰石的制備：采用溶膠-凝膠法制備鍶納米羥基磷灰石，通過(guò)Ca、P測(cè)試其Ca/P比及Sr含量，進(jìn)行TEM、XRD、FTIR檢測(cè)。
　　3.鍶納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體的制備：在體外化學(xué)條件下探討前述制備的鍶納米羥基磷灰石（α=0，α=0.5）吸

5、附原花青素（濃度為4mg/ml）的條件（溫度、PH、時(shí)間）,并選擇最佳條件下完成鍶納米羥基磷灰石對(duì)原花青素的吸附，制備復(fù)合體，通過(guò)TEM、SEM觀察表面形貌。
　　4.鍶納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體涂膜的制備及其對(duì)牙本質(zhì)小管封閉作用研究：以滲透型丙烯酸樹(shù)脂(Eudragit RL100)為成膜基質(zhì)，鍶納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體、納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體、鍶納米羥基磷灰石、納米羥基磷灰石及單純的4mg/ml原花青素作為材料制備

6、涂膜，選用實(shí)驗(yàn)一制備的牙本質(zhì)標(biāo)本，編號(hào)后隨機(jī)分組：A、鍶納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體涂膜組；B、納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體涂膜組；C、鍶納米羥基磷灰石涂膜組；D、納米羥基磷灰石涂膜組；E、含氟涂膜組（陽(yáng)性對(duì)照）；F、原花青素涂膜組；G、空白組，每組5個(gè)，涂膜均勻涂布在牙本質(zhì)塊表面并進(jìn)行體外循環(huán)，模擬口腔環(huán)境的條件下每天刷牙兩次，每次3分鐘和換液兩次，循環(huán)7天后用丙酮去盡涂膜，通過(guò)體式顯微鏡觀察涂膜保存情況及丙酮去盡涂膜情況，SEM觀察

7、牙本質(zhì)小管封閉情況，EDX、FTIR分析牙本質(zhì)小管內(nèi)封閉物成分；重新制備4*4*4mm牙本質(zhì)塊，EDTA溶液+超聲開(kāi)放牙本質(zhì)小管，除頰側(cè)牙本質(zhì)面其余使用指甲油封閉，隨機(jī)選擇10塊涂布含有羅丹明B的涂膜切片送檢CLSM，觀察涂膜進(jìn)入牙本質(zhì)小管的深度，再隨機(jī)選擇6塊分別分為鍶納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體涂膜組、含氟涂膜組及空白組投入羅丹明B溶液中，切片送檢CLSM對(duì)比觀察涂膜封閉性能。
　　5.細(xì)胞毒性檢測(cè)：分別制備SrHAP-PA,

8、HAP-PA,SrHAP和HAP復(fù)合體粉末及相應(yīng)涂膜不同濃度浸提液，其中復(fù)合體粉末濃度分別為100%，50%，10%，涂膜濃度分別為2倍、4倍及8倍，通過(guò)牙齦成纖維細(xì)胞和牙髓細(xì)胞應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)前述浸提液的細(xì)胞毒性，以驗(yàn)證其生物安全性。
　　結(jié)果：1.原花青素(濃度為4mg/ml)作用在開(kāi)放牙本質(zhì)小管上浸泡在SBF溶液中可形成礦化物并封閉開(kāi)放的牙本質(zhì)小管，該礦化物經(jīng)EDX及FTIR分析提示為HAP。
　　2.采用溶膠-凝

9、膠法可以制備出晶型好，直徑100nm左右，(Ca+Sr)/P比約為1.67鍶納米羥基磷灰石。
　　3.在溫度為37℃、PH偏酸性（PH=6.4）及時(shí)間為1h時(shí)，鍶納米羥基磷灰石對(duì)原花青素有最大吸附作用，可形成鍶納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體。
　　4.以滲透型丙烯酸樹(shù)脂為成膜基質(zhì)，鍶納米羥基磷灰石原花青素復(fù)合體為材料可制備出一種保存時(shí)間長(zhǎng)，封閉牙本質(zhì)小管效果佳的抗牙本質(zhì)敏感的涂膜，該涂膜在模擬的口腔環(huán)境下，通過(guò) SEM、CLS

10、M、EDX、FTIR檢測(cè)證實(shí)該涂膜可快速形成礦化物，封閉牙本質(zhì)小管。
　　5.CCK-8檢測(cè)前述復(fù)合體及涂膜不同濃度浸提液對(duì)人牙周膜成纖維樣細(xì)胞及牙髓細(xì)胞細(xì)胞毒性結(jié)果顯示均無(wú)細(xì)胞毒性。
　　結(jié)論：本研究證實(shí)原花青素可封閉開(kāi)放的牙本質(zhì)小管，通過(guò)溶膠-凝膠法制備獲得鍶納米羥基磷灰石并制備獲得鍶納米羥基磷灰石-原花青素復(fù)合物；以滲透型丙烯酸樹(shù)脂作為成膜基質(zhì)，以鍶納米羥基磷灰石-原花青素復(fù)合物作為有效成分所制備的涂膜材料可有效封閉牙