擬果蠅細胞系建立及6種果蠅PVR基因的分子系統(tǒng)學(xué)研究.pdf

1、擬果蠅細胞系的建立：以擬果蠅早期胚胎為材料，采用常規(guī)方法獲取發(fā)育4-6h的果蠅胚胎細胞，用改良的M3(BF)培養(yǎng)液體外培養(yǎng)，經(jīng)50d左右的原代培養(yǎng)，當小細胞長滿培養(yǎng)皿后進行傳代培養(yǎng)，以后平均每隔10d傳代一次。在細胞系傳至10代左右時按照細胞系建立標準檢測細胞系的一系列生物學(xué)特性。結(jié)果顯示：24h后細胞貼壁，開始分化，先后依次觀察到肌肉細胞，神經(jīng)細胞，脂肪細胞，鱗狀上皮細胞，血囊細胞的分化。2個月后所有這些分化的細胞都逐漸消失，只剩下生

2、長較為一致的圓形小細胞。當圓形小細胞長滿培養(yǎng)皿時進行傳代。經(jīng)液氮凍存的細胞復(fù)蘇后活性達90％以上。細胞維持體外生長將近2年，傳至60代，是一株成功的擬果蠅細胞系，命名為LJY-SIM。
　　 6種果蠅PVR基因的分子系統(tǒng)學(xué)研究：通過PCR擴增和克隆測序的方法，獲得了黑腹果蠅種亞組內(nèi)的6個種的PVR基因的序列。以細針果蠅(Drosophila eugracils)為外群，運用鄰接法，最大似然法和貝葉斯法三種方法構(gòu)建了melanog

3、aster種亞組的系統(tǒng)進化樹，對其系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進行了分析，并利用bootstrap對分析結(jié)果進行了置信度檢驗。分子進化分析表明：這個基因的編碼區(qū)段高度保守，明顯表現(xiàn)出受到純化選擇的痕跡，其超高的Ks/Ka比值及GCIII含量都充分顯示如此。而這個基因的內(nèi)含子區(qū)存在明顯的插入和缺失，包含有豐富的進化信息。基因樹表明：D.melanogaster最先分化出來，然后是D.simulans和D.mauritiana，接著是，它們聚為單獨的一個亞