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1、目的:本課題通過(guò)臨床觀(guān)察和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),了解氨基末端激酶(JNK)、磷酸化氨基末端激酶(P-JNK)、轉(zhuǎn)錄因子(C-JUN)在哮喘大鼠肺組織及氣道中的表達(dá)及苗藥熱咳喘對(duì)其干預(yù)的影響;探討JNK/SAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與支氣管哮喘急性發(fā)作的相關(guān)性、苗藥熱咳喘對(duì)該通路的調(diào)控作用及臨床療效,對(duì)研究哮喘氣道炎癥的產(chǎn)生機(jī)制和以苗藥熱咳喘為基礎(chǔ)方的新藥研發(fā)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
方法:將符合“納入標(biāo)準(zhǔn)”的60例研究對(duì)象,隨機(jī)分為常規(guī)組和苗藥熱咳喘
2、組。兩組患者均予西醫(yī)常規(guī)治療,根據(jù)病情采用解痙平喘、氧療、控制呼吸道感染、祛痰止咳等治療。苗藥熱咳喘組在上述治療基礎(chǔ)上給予苗藥熱咳喘膠囊口服。上述治療共7天。觀(guān)察兩組患者中醫(yī)證候療效、治療前后主要癥狀體征積分,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。將60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、對(duì)照組、苗藥熱咳喘組、地塞米松組,每組15只,正常組用生理鹽水造模,其余三組均制成支氣管哮喘模型,第1天、8天分別腹腔注射混懸液(含10%卵蛋白(OVA),AL(OH)。及百日咳桿
3、菌)1ml致敏;第15天開(kāi)始霧化激發(fā),每日一次,激發(fā)前半小時(shí)給予干預(yù)治療,苗藥熱咳喘組予熱咳喘膠囊粉0.33g/kg熬湯灌胃;地塞米松組予醋酸地塞米松注射液2mg/kg腹腔注射;正常組和對(duì)照組予等量生理鹽水灌胃。末次激發(fā)后6小時(shí)內(nèi)處死各組大鼠,在超凈工作臺(tái)內(nèi)以無(wú)菌器械取肺組織及氣道標(biāo)本,分別行HE染色,觀(guān)察肺組織病理變化情況,通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)JNK、P-JNK及C-JUN基因在各組大鼠肺組織氣道不同部位的表達(dá)情況,RT-PCR技術(shù)
4、分別檢測(cè)JNK、P-JNK及C-JUN mRNA在各組模型大鼠肺組織氣道中的表達(dá)水平。
結(jié)果:1、中醫(yī)證候療效比較:苗藥熱咳喘組在改善哮喘患者中醫(yī)證候療效方面明顯優(yōu)于常規(guī)組(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2、兩組患者治療前后主要癥狀、體征平均積分及總積分較比較:兩組治療后較治療前平均積分及總積分均明顯降低(P<0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;苗藥熱咳喘組較常規(guī)組癥狀體征平均積分及總積分降低(P<0.05),差異
5、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。動(dòng)物實(shí)驗(yàn):1、JNK、P-JNK及C-JUN基因在大鼠肺組織及氣道不同部位的表達(dá)情況:JNK、P-JNK及C-JUN基因主要表達(dá)部位在大鼠的支氣管上皮細(xì)胞的胞漿和胞核中。各組大鼠均有棕黃色顆粒表達(dá),其中正常組棕黃色顆粒少、染色淺、表達(dá)最弱,光密度值最小;對(duì)照組棕黃色顆粒最多、染色深、光密度值最大,差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);熱咳喘膠囊組和地塞米松組棕黃色顆粒數(shù)量較對(duì)照組少、染色較弱,光密度值小于對(duì)照組,差異
6、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而苗藥熱咳喘組光密度值表達(dá)強(qiáng)于地塞米松組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
2、JNK、P-JNK及C-JUN mRNA在肺組織及氣道的表達(dá)水平:對(duì)照組JNK、P-JNK及C-JUN mRNA表達(dá)量明顯增高,與其他三組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);對(duì)照組JNK、P-JNK及C-JUN mRNA含量的變化與正常組比較,差異有非常顯著性意義(P<0.01);苗藥熱咳喘組、地塞米松組兩組
7、間比較JNK、P-JNK及C-JUN mRNA表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3、肺組織及氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況及病理學(xué)改變:正常組肺組織及支氣管結(jié)構(gòu)正常,肺泡間隔正常,未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組支氣管粘膜上皮細(xì)胞纖維化,明顯增生、充血、水腫、壞死、脫落,平滑肌收縮、管腔狹窄、肌層增厚、基底膜肥厚;鏡下可見(jiàn)肺組織及氣道大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。苗藥熱咳喘組和地塞米松組支氣管管腔狹窄程度較對(duì)照組明顯減輕,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯。
結(jié)論:1
8、、臨床觀(guān)察顯示苗藥熱咳喘與西醫(yī)聯(lián)合用藥可以進(jìn)一步改善哮喘患者癥狀體征,提高臨床療效。
2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示JNK、P-JNK及C-JUN在正常組呈低表達(dá),對(duì)照組呈高表達(dá),說(shuō)明JNK、P-JNK及C-JUN與氣道炎癥的發(fā)生呈正相關(guān)。
3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示苗藥熱咳喘組和地塞米松組與對(duì)照組比較,JNK、P-JNK及C-JUN表達(dá)明顯減少,肺組織及氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)也明顯改善,說(shuō)明二者有可能通過(guò)抑制支氣管哮喘大鼠JNK/SAPK信號(hào)轉(zhuǎn)
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