BCG對(duì)哮喘氣道炎癥影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究減毒活菌卡介苗(BacillusCalmette-GuerinBCG)對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥的影響，分析經(jīng)BCG干預(yù)后哮喘小鼠脾單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-4、IL．10的變化，肺組織GATA-3的表達(dá)、外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞CD4+CD25+的變化，以探討B(tài)CG抗哮喘氣道炎癥可能的作用機(jī)制。 方法：健康雄性昆明小鼠(6—8周齡、體重18—20g)隨機(jī)分成四組，每組8只。1)哮喘發(fā)作組：用10％卵清蛋白(Ovalbum

2、inOVA)0．1ml與佐劑10％氫氧化鋁0．2ml腹腔注射致敏，5％OVA霧化吸入激發(fā)建立小鼠哮喘模型。2)BCG早期干預(yù)組：OVA致敏、激發(fā)方式同哮喘發(fā)作組，在OVA致敏前及后5天，每只小鼠皮內(nèi)注射BCG0．025mg。3)BCG晚期干預(yù)組：OVA致敏激發(fā)同哮喘發(fā)作組，在最后一次激發(fā)后1小時(shí)之內(nèi)皮內(nèi)注射BCG0．025mg干預(yù)。4)正常對(duì)照組：以生理鹽水代替OVA行腹腔注射及霧化吸入。所有四組小鼠于未次激發(fā)24小時(shí)后收集標(biāo)本，檢測(cè)小

3、鼠支氣管肺泡灌洗液(BronchoalveolarLavageFluidBALF)細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞(EosinophilEOS)計(jì)數(shù)；肺組織切片行HE染色觀察病理改變，并用免疫組織化學(xué)方法判斷肺組織GATA-3表達(dá)的情況：ELISA法檢測(cè)脾單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的’IL-4、IL．10的水平；流式細(xì)胞儀觀察外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(CD4+CD25+RegulatoryTCellCD4+CD25+Treg)的變化。

4、 結(jié)果： 1．哮喘發(fā)作組小鼠其肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(EOS)較正常對(duì)照組增高，BCG早期干預(yù)組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)與EOS計(jì)數(shù)與哮喘組相比明顯降低，但BCG晚期干預(yù)組小鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù)與EOS計(jì)數(shù)與哮喘組相比無(wú)明顯改變。 2．病理組織學(xué)顯示BCG早期干預(yù)組小鼠肺部組織嗜酸性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較哮喘發(fā)作組小鼠明顯減少，晚期干預(yù)組小鼠其肺部嗜酸性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與

5、哮喘發(fā)作組沒(méi)有明顯差別。不過(guò)，正常對(duì)照組小鼠未見(jiàn)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 3．與正常對(duì)照組相比，哮喘發(fā)作組小鼠脾單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清液的IL-4水平增高、IL．10水平降低；與哮喘發(fā)作組小鼠相比，BCG早期干預(yù)組小鼠脾單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-10水平增高，同時(shí)1I,-4的水平降低。 4．肺部組織切片免疫組化染色顯示哮喘發(fā)作組小鼠GATA-3的表達(dá)強(qiáng)于BCG早期干預(yù)組小鼠。 5．哮喘發(fā)作組小鼠外周血CD4+CD25+Tr