氨茶堿對哮喘大鼠氣道炎癥及重塑影響的研究.pdf

1、目的:支氣管哮喘(簡稱哮喘)是世界范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅公眾健康的一種主要慢性呼吸道炎癥性疾病,全世界大約有1.5億人患哮喘。我國兒童哮喘的患病率約為1％,有些地方可達(dá)3％以上,是致使兒童生活質(zhì)量下降的主要疾病影響因素,且其患病率仍呈明顯上升趨勢。哮喘是支氣管高反應(yīng)狀態(tài)下由變應(yīng)原或其他因素引起的許多炎性細(xì)胞如嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophil,EOS)、肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤的慢性氣道炎癥性疾病。氣道含有的大量炎癥細(xì)胞及炎癥介質(zhì)可以引起氣道壁細(xì)

2、胞及組成物質(zhì)發(fā)生改變而導(dǎo)致重塑發(fā)生。糖皮質(zhì)激素是防治哮喘最有效的抗炎藥物,但其副作用較大,即使吸入療法也會對人體產(chǎn)生不良影響。氨茶堿是目前治療哮喘的主要藥物之一,新的觀點(diǎn)認(rèn)為氨茶堿除擴(kuò)張支氣管平滑肌的作用外,還有抗炎作用。但其作用機(jī)制尚未完全明了。本課題通過實(shí)驗(yàn)研究觀察氨茶堿對哮喘大鼠氣道炎癥的影響及改善氣道重塑的作用,并通過觀察哮喘大鼠體內(nèi)白細(xì)胞介素-25(interleukin-25,IL-25)、白細(xì)胞介素-12(interleu

3、kin-12,IL-12)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的變化,進(jìn)一步探討氨茶堿治療哮喘的作用機(jī)制。
　　 方法:取30只Wistar雄性大鼠,8～12周齡,體重(160±20)g,隨機(jī)分成正常對照組、哮喘模型組、氨茶堿治療組各10只。哮喘模型組和氨茶堿治療組于第1天、第8天和

4、第15天每只大鼠腹腔注射含100mg卵蛋白(Ovalbumin,OVA)和100mg氫氧化鋁的生理鹽水1ml致敏,正常對照組用等量的生理鹽水進(jìn)行致敏。哮喘模型組于第22天開始將大鼠放入自制的不完全封閉的有機(jī)玻璃箱內(nèi),用空氣壓縮泵噴入1％OVA溶液激發(fā),每天1次,激發(fā)20分鐘,連續(xù)1周;氨茶堿治療組在每次卵蛋白激發(fā)前30分鐘給予氨茶堿60mg/kg腹腔注射;正常對照組給予生理鹽水激發(fā)。各組于末次誘發(fā)哮喘后24小時內(nèi)用10％水合氯醛3.5m

5、l/kg腹腔注射麻醉,分離右側(cè)股動脈,自根部剪斷留取血標(biāo)本,酶聯(lián)免疫法測定血清中IL-12,IL-25的水平;分離大鼠氣管,結(jié)扎左肺,自氣管內(nèi)緩慢向右肺組織灌入4％多聚甲醛至右肺膨脹,然后結(jié)扎右支氣管,置同一固定液固定,取右肺中葉組織,常規(guī)石蠟包埋、切片,取石蠟組織切片檢測大鼠肺組織內(nèi)NF-κB、MMP-9的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1哮喘模型組大鼠被激發(fā)后的行為學(xué)改變
　　 哮喘模型組大鼠在吸入OVA后不久即

6、出現(xiàn)躁動不安,搔抓顏面皮毛等過敏癥狀,繼而大鼠俯伏不動,出現(xiàn)呼吸急促,呼吸困難(明顯的腹式呼吸),部分大鼠可聞及響亮的呼氣相喘鳴音,口鼻流出粘液,嚴(yán)重者可出現(xiàn)呼吸不規(guī)則,反復(fù)激發(fā)后大鼠毛色失去光澤,精神不振和反應(yīng)遲鈍。
　　 2肺組織病理特點(diǎn)
　　 正常對照組氣道上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常,黏膜及黏膜下無明顯炎性細(xì)胞浸潤(Fig.1-1)。哮喘模型組大鼠細(xì)支氣管痙攣、收縮呈菊花狀,管腔內(nèi)有分泌物,細(xì)支氣管、小血管周圍見明顯炎性細(xì)胞

7、浸潤,以EOS、淋巴細(xì)胞為主,亦見中性粒細(xì)胞;肺泡間隔增寬,有纖維化,大量淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤(Fig.1-2)。氨茶堿治療組大鼠細(xì)支氣管無明顯痙攣、收縮,管腔內(nèi)無分泌物,管壁周圍炎性細(xì)胞浸潤明顯減少,肺泡壁間隔病變明顯改善(Fig.1-3)。
　　 3氨茶堿對哮喘大鼠血清中IL-12、IL-25濃度的影響
　　 哮喘模型組血清中IL-12的濃度低于正常對照組(P＜0.01)和氨茶堿治療組(P＜0.01);氨茶堿治療組

8、血清中IL-12的濃度低于正常對照組(P＜0.01,Table1)。哮喘模型組血清中IL-25的濃度高于正常對照組(P＜0.01)和氨茶堿治療組(P＜0.01);氨茶堿治療組血清中IL-25的濃度高于正常對照組(P＜0.01,Table1)。
　　 4氨茶堿對哮喘大鼠肺組織內(nèi)NF-κB、MMP-9表達(dá)的影響
　　 哮喘模型組肺組織內(nèi)NF-κB的表達(dá)高于正常對照組(P＜0.01)和氨茶堿治療組(P＜0.01);氨茶堿治療組

9、肺組織內(nèi)NF-κB的表達(dá)高于正常對照組(P＜0.01,Table2)。哮喘模型組肺組織內(nèi)MMP-9的表達(dá)高于正常對照組(P＜0.01)和氨茶堿治療組(P＜0.01);氨茶堿治療組肺組織內(nèi)MMP-9的表達(dá)高于正常對照組(P＜0.01,Table2)。
　　 5相關(guān)與回歸分析檢驗(yàn)結(jié)果
　　 經(jīng)Pearson直線相關(guān)與logistic回歸分析檢測,血清IL-12與IL-25水平兩者之間呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.767,P＜0

10、.01),回歸方程:Y=70.066-1.237X(F=40.116,P＜0.01,Fig.3)。肺組織內(nèi)NF-κB與血清IL-12水平兩者之間呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.672,P＜0.01),回歸方程:Y=38.051-33.73X(F=23.018,P＜0.01,Fig.4)。肺組織內(nèi)NF-κB與血清IL-25水平兩者之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=:0.795,P＜0.01),回歸方程:Y=17.249+64.371X(F=48.23

11、8,P＜0.01,Fig.5)。肺組織內(nèi)NF-κB與MMP-9水平兩者之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.881,P＜0.01),回歸方程:Y=0.093+0.521X(F=91.317,P＜0.01,Fig.6)。
　　 結(jié)論:
　　 1哮喘大鼠體內(nèi)Th1反應(yīng)減弱,Th2反應(yīng)增強(qiáng),支持哮喘發(fā)病中存在Th1/Th2比值失衡學(xué)說。氨茶堿具有調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡的作用。
　　 2氨茶堿可明顯抑制哮喘大鼠肺組織中NF-κB