慢性HBV感染患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3和RORγt mRNA的表達(dá)及意義.pdf

1、研究調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cell，Treg細(xì)胞）、輔助性T細(xì)胞17(T helper cell17，Th17細(xì)胞)的轉(zhuǎn)錄因子叉頭?翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子（Forkhead box protein P3， FoxP3）、孤獨(dú)核兒受體γt（Orphan nuclear receptorγt，RORγt）mRNA在慢性HBV感染不同階段患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells，

2、PBMC）中的表達(dá)水平，分析其與肝功能丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Aspartate amino transferase， AST）、總膽紅素（Total bilirubin，TBIL）、HBsAg、HBeAg、HBV DNA的關(guān)系，并探討Treg、Th17細(xì)胞在慢性 HBV感染免疫耐受期可能發(fā)揮的作用，以期用外周血指標(biāo)來判斷免疫耐受狀態(tài)及變化，并指導(dǎo)臨床通過免疫治

3、療打破免疫耐受，對(duì)HBV感染進(jìn)行早期有效治療。
　　方法：
　　收集天津市第二人民醫(yī)院2014年4月至2015年3月門診或住院未經(jīng)過抗HBV治療的慢性HBV感染者83例，包括免疫耐受期24例，免疫清除期24例，非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期35例，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）技術(shù)檢測(cè)PBMC中FoxP3mRNA、ROR

4、γtmRNA的Ct值，用2-DDCt方法計(jì)算其相對(duì)表達(dá)量。同時(shí)采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)受檢者ALT、AST、 TBIL，應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物HBsAg、HBeAg、HBeAb，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行病毒HBV DNA定量。以健康人14例作為對(duì)照組，比較FoxP3mRNA、RORγt mRNA在各組中的相對(duì)表達(dá)量，及其與肝功能、病毒學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性，探究其在免疫耐受期慢性 HBV感染中的作用機(jī)制。另對(duì)83例研究對(duì)象中進(jìn)行肝

5、組織活檢病理檢查的慢性HBV感染患者27例進(jìn)行肝細(xì)胞炎癥與纖維化程度分析，分析肝組織炎癥和纖維化程度與FoxP3、RORγt mRNA相對(duì)表達(dá)量的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.各期HBV感染者及健康對(duì)照組之間FoxP3mRNA相對(duì)表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。免疫耐受期、免疫清除期及非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期患者均高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），免疫耐受期FoxP3 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于免疫清除期

6、與非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期組患者（0.252±0.410vs0.195±0.381，0.206±0.498），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。免疫清除期與非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期組患者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.737）。
　　2.免疫清除期RORγt mRNA相對(duì)表達(dá)量高于健康對(duì)照組、免疫耐受期組、非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期組（0.421±0.877vs0.102±0.485，0.222±0.743，0.230±0.391），差異均有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。免疫耐受期、非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期組 RORγtmRNA相對(duì)表達(dá)量均高于健康對(duì)照組（0.222±0.743，0.230±0.391vs0.102±0.485），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），免疫耐受期、非活動(dòng)或低（非）復(fù)制期組兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.831）。
　　3. FoxP3mRNA相對(duì)表達(dá)量與 ALT、AST、TBIL水平均無明顯相關(guān)性，與HBV DNA顯著正相關(guān)(P<0.05)。R

8、ORγtmRNA相對(duì)表達(dá)量與ALT、AST均顯著正相關(guān)(P<0.01)，與TBIL、HBV DNA水平均無明顯相關(guān)性。FoxP3mRNA的相對(duì)表達(dá)量與RORγt mRNA成顯著正相關(guān)（r=0.728,P<0.001）。
　　4.83例研究對(duì)象中HBV DNA陽性組FoxP3mRNA相對(duì)表達(dá)量高于DNA陰性組（0.271±0.341vs0.208±0.669），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HBV DNA陽性組RORγt mRN

9、A相對(duì)表達(dá)量高于DNA陰性組（0.409±0.693vs0.362±0.406），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.83例慢性HBV感染患者中HBeAg陽性組FoxP3mRNA相對(duì)表達(dá)量低于HBeAg陰性組（0.165±0.328vs0.232±0.507），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.884）。HBeAg陽性組RORγt mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于HBeAg陰性組（0.361±0.823vs0.240±0.398），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<

10、0.05）。
　　6.對(duì)83例研究對(duì)象中進(jìn)行肝組織活檢病理檢查的27例患者進(jìn)行分析，其中包括免疫耐受期患者2例（病理診斷分別為G1S1-2，G1-2S1）患者肝組織輕度炎癥損傷與輕度纖維化；免疫清除期患者14例（病理診斷2例為活動(dòng)性肝硬化，炎癥分級(jí)G1有3例，G≥2級(jí)有9例，纖維化程度分期，S1及以下有8例，S≥2有4例）；非活動(dòng)期患者11例（炎癥程度分級(jí)G1有8例，G2有3例，纖維化程度分期S1及S2以下9例，S≥2的2例）。<

11、br>　　7.27例進(jìn)行肝組織病理檢查的患者中肝臟炎癥程度為 G≥2的患者(14例)PBMC中 FoxP3mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于 G1組（13例）（0.162±0.280vs0.044±0.066），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），G≥2組RORγtmRNA的相對(duì)表量高于G1組（0.489±1.135vs0.073±0.062），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；肝臟纖維化程度為S>1的患者（11例）PBMC中RORγtmRNA的相

12、對(duì)表達(dá)量高于S1組（16例）（0.589±1.273vs0.083±0.076），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），S>1組FoxP3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量與S1組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.免疫耐受期 HBV感染者存在 Treg/Th17細(xì)胞失衡，監(jiān)測(cè)其轉(zhuǎn)錄因子FoxP3mRNA、RORγtmRNA表達(dá)情況，能夠有助于評(píng)估機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)，可能為抗病毒治療時(shí)機(jī)選擇提供參考。
　　2. Tr

13、eg細(xì)胞在免疫耐受期占優(yōu)勢(shì)，可能為導(dǎo)致免疫耐受機(jī)體免疫狀態(tài)的原因之一。Th17細(xì)胞在免疫清除期占優(yōu)勢(shì)，Th17細(xì)胞具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)作用，利于病毒的清除。
　　3.FoxP3mRNA與HBV DNA載量正相關(guān)，抑制免疫反應(yīng)，HBV DNA高載量復(fù)制。RORγtmRNA促進(jìn)炎癥反應(yīng)，HBeAg發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換后，炎癥反應(yīng)恢復(fù)正常，RORγtmRNA表達(dá)量下降
　　4. RORγtmRNA在肝細(xì)胞纖維化進(jìn)程中可能發(fā)揮著重要的作用，有