腫瘤患者外周血T淋巴細胞活化前后FOXP3、Fas-FasL的表達及意義.pdf

1、目的： 通過激活患者自身免疫系統，誘導特異性細胞免疫，可以增強機體的抗癌能力，阻止腫瘤的生長、擴散和復發(fā)，以達到清除或控制腫瘤的目的。近幾年研究發(fā)現被腫瘤特異性抗原調節(jié)T細胞(Treg)激活的反調節(jié)效應T細胞在腫瘤治療的作用上有重要的抑制作用。本文旨在檢測腫瘤患者外周血T淋巴細胞的體外增殖活化情況，同時分析其活化前后FOXP3以及Fas/FasL的表達。為臨床腫瘤患者的免疫治療提供理論基礎。 方法： 本研究在蘇大

2、免疫所自行研制的鼠抗人CD28激發(fā)型單克隆抗體(2F5)的基礎上，采用腹水誘生法及免疫親和層析法進行單抗的獲取和純化，Ficoll密度梯度離心法獲取腫瘤患者外周血T淋巴細胞。利用CD3單抗聯合CD28單抗體外活化T淋巴細胞。MTT法檢測T細胞的增值效應，ELISA法檢測活化T淋巴細胞培養(yǎng)上清中IL-2、及IL-10的分泌，免疫熒光及流式細胞術分析其經激發(fā)性CD28單抗聯合CD3單抗活化前后FOXP3以及Fas/FasL的表達。

3、結果： 膜水誘生法獲得了CD28單克隆抗體3.8 mg/ml。MTT實驗結果表明，72h時，激發(fā)性CD28單抗聯合抗CD3單抗，可較好促進T淋巴細胞(患者及對照組)的顯著增殖。ELISA檢測結果顯示，CD3單抗聯合激發(fā)型CD28單抗作用組中IL-2的分泌含量增高，IL-10的分泌含量降低。經免疫熒光及流式細胞術對腫瘤患者外周血T淋巴細胞中Treg細胞的特異性標志FOXP3蛋白進行檢測，結果顯示，腫瘤患者外周血中FOXP3蛋白表達

4、比例為(6.208±2.754)％，對照組為(2.53±0.638)％，而活化后比例為(5.488±3.675)％。對照組為(2.173±1.137)％。同時T淋巴細胞表面的Fas/FasL的檢測結果顯示Fas的表達為(1.467±0.590)％，對照組為(1.122±0.598)％，活化后分別為(3.692±1.822)％、(3.6±0.657)％，而FasL表達二者分別為(2.89±1.027)％、(2.532±0.967)％，活化