藏藥“佐太”中重金屬汞的蓄積性及長(zhǎng)期使用致潛在腎損傷的機(jī)制研究.pdf

1、目的
　　本研究以藏藥“佐太”為研究對(duì)象，對(duì)其長(zhǎng)期用藥后藥物中重金屬汞在血液和腎臟中的蓄積行為及其對(duì)腎臟的潛在腎毒性作用進(jìn)行初步研究，以期揭示藏藥“佐太”可能存在的潛在腎毒性及其作用機(jī)制，為藏藥“佐太”的安全性機(jī)制研究提供前期基礎(chǔ)，為臨床安全合理有效地使用“佐太”提供一定的理論依據(jù)。
　　方法
　　（1）通過(guò)最大給藥量法分別進(jìn)行KM小鼠和SD大鼠的急性毒性試驗(yàn)，初步探討藏藥“佐太”的安全性；
　?。?）采用電感耦

2、合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS），分別檢測(cè)給藥后90天、135天、180天及停藥30天和120天后大鼠血液及腎臟中汞（Hg）的含量，考察Hg在動(dòng)物血液中的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其在腎臟中的蓄積行為；
　?。?）通過(guò)酶聯(lián)免疫分析法（ELISA），分別測(cè)定給藥后90天、135天、180天及停藥后30天大鼠血液中血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN），尿液中腎損傷因子-1（Kim-1）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、視黃醇蛋白（RBP

3、）、β2-微球蛋白（β2-MG），及腎組織中腎損傷因子-1（Kim-1）、金屬硫蛋白（MT）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量或活性，此外，對(duì)停藥120天后大鼠腎組織中GSH含量進(jìn)行再次檢測(cè)，探討藏藥“佐太”長(zhǎng)期用藥過(guò)程中蓄積在動(dòng)物體內(nèi)的Hg對(duì)動(dòng)物血液、尿液及腎臟中與腎損傷相關(guān)的蛋白或酶水平的影響；
　　（4）采用實(shí)時(shí)熒光定量法（QRT-PCR），考察給藥后18

4、0天、停藥30天后，“佐太”對(duì)大鼠腎臟中Kim-1、金屬硫蛋白-1（MT-1）、金屬硫蛋白-2（MT-2）、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST-pi）及停藥120天后大鼠腎臟中GST-pi的mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響；
　　（5）通過(guò)HE染色法、免疫組化法、流式細(xì)胞儀（Flow Cytometer，F(xiàn)CM）等方法對(duì)給藥90天、135天、180天后及停藥30后天大鼠腎臟系數(shù)、腎組織病理、腎Ki67蛋白表達(dá)，腎細(xì)胞周期及凋亡率進(jìn)行檢測(cè)，考察藏藥

5、“佐太”對(duì)腎組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞周期及凋亡率的影響。
　　結(jié)果
　?。?）藏藥“佐太”最大濃度、最大容積分別給KM小鼠和SD大鼠1日內(nèi)一次性給藥3g/kg(相當(dāng)于成人臨床每日推薦劑量0.667mg/kg的4498倍)，連續(xù)觀(guān)察14天，動(dòng)物外觀(guān)體征、一般活動(dòng)正常，飼料消耗量正常，體質(zhì)量逐步增長(zhǎng)，無(wú)明顯急性毒性反應(yīng)，初步表明本品屬無(wú)明顯急性毒性藥物；
　?。?）藏藥“佐太”連續(xù)給藥180天后，隨著給藥時(shí)間的延

6、長(zhǎng)，血汞和腎汞含量均會(huì)隨之增加，并存在劑量依賴(lài)性；大鼠血中的汞較腎臟中的汞代謝快，停藥后能基本恢復(fù)，而腎臟中的汞雖然呈大幅度下降，但仍有較大的殘留蓄積，初步證實(shí)“佐太”中汞的主要靶器官是腎臟；
　?。?）藏藥“佐太”在連續(xù)給藥180天及停藥30天后，對(duì)各組大鼠血清中Scr和BUN，尿液中Kim-1、NAG、RBP、β2-MG，腎組織MDA、SOD沒(méi)有明顯影響，但在給藥90天和180天分別造成腎臟中Kim-1、MT、GSH-Px和G

7、SH水平的變化，停藥30天后，除GSH活性仍偏高外，其余指標(biāo)均可逆性恢復(fù)，繼續(xù)停藥至停藥120天后，GSH活性也恢復(fù)到正常水平。
　　（4）藏藥“佐太”連續(xù)給藥180天后，各給藥組MT-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著增加，中、低劑量組Kim-1、GST-Pi mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯升高，而中、低劑量組MT-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量表現(xiàn)為減少。停藥30天后，Kim-1、MT-1、MT-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量已恢復(fù)至與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯

8、差異，而GST-Pi mRNA相對(duì)表達(dá)量仍然偏高，推測(cè)這是機(jī)體的解毒系統(tǒng)對(duì)外源性物質(zhì)刺激所產(chǎn)生的一種應(yīng)激解毒表現(xiàn)，繼續(xù)停藥至120天后，GST-Pi mRNA相對(duì)表達(dá)量基本恢復(fù)，其中低劑量組較給藥期間的值出現(xiàn)了明顯回調(diào)，這可能與機(jī)體的多向調(diào)控機(jī)制有關(guān)，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究；
　　（5）藏藥“佐太”在連續(xù)給藥180天及停藥30天后，各組大鼠腎臟系數(shù)、腎組織病理、腎Ki67蛋白表達(dá)，腎細(xì)胞周期及凋亡率基本沒(méi)有明顯變化，初步表明“佐

9、太”對(duì)大鼠腎組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞周期及凋亡率的沒(méi)有明顯影響。
　　結(jié)論
　?。?）藏藥“佐太”為無(wú)明顯急性毒性的藥物；
　?。?）長(zhǎng)期給予藏藥“佐太”，可引起大鼠血汞含量升高，并可造成汞在腎臟中大量蓄積，長(zhǎng)期停藥仍有殘留，推測(cè)其在腎臟中為永久性的不可逆蓄積；
　?。?）“佐太”長(zhǎng)期大量使用可能引起腎臟潛在的可逆性損傷，該作用機(jī)制可能與通過(guò)影響Kim-1、MT、GSH、GSH-Px的含量或活性及Kim