ET-1、eNOS基因多態(tài)性與江西漢族人群原發(fā)性高血壓及硝苯地平降壓療效的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH)是一種多基因遺傳與環(huán)境因素相互作用的慢性疾患，且是冠心病、腦卒中等心腦血管疾病及終末期腎病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。許多研究證實(shí)，在人類的基因中存在著高血壓病的易感基因。但目前為止，人們還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)某個(gè)人類基因的多態(tài)性與高血壓的發(fā)生直接相關(guān)。既往的研究表明，內(nèi)皮素-1(ET-1)表達(dá)增多能夠增強(qiáng)動(dòng)脈血管的阻力，高血壓病患者血漿中ET-1水平明顯高于血壓正常者的人群，

2、而且靶器官的損害更嚴(yán)重，提示ET-1可能會(huì)增加高血壓病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn);另外，人們還發(fā)現(xiàn)在高血壓患者的動(dòng)脈壁內(nèi)有ET-1受體基因的過(guò)表達(dá)，這可能表明ET-1導(dǎo)致高血壓發(fā)生的機(jī)制是通過(guò)影響內(nèi)皮功的能障礙或促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)的;使用ET-1受體拮抗劑能夠降低慢性高血壓患者的血壓，從而進(jìn)一步證實(shí)ET-1與高血壓存在明顯的相關(guān)性。既往的研究也表明，一氧化氮(NO)在心血管疾病中發(fā)揮了重要作用，一氧化氮是在一氧化氮合酶(NOS)催化下生

3、成的。三種不同的一氧化氮合酶在心血管疾病中的作用各不相同，通過(guò)對(duì)一氧化氮合酶的干預(yù)將成為心血管疾病治療的新策略。鑒于上述的研究結(jié)果提示ET-1、eNOS與高血壓的發(fā)生有關(guān)，因此，ET-1、eNOS基因已被認(rèn)為是高血壓病的高危候選基因。篩查原發(fā)性高血壓相關(guān)基因的單核苷酸多態(tài)性，進(jìn)行基因分型與疾病相關(guān)性研究及與降壓療效關(guān)系研究是對(duì)EH進(jìn)行早期診斷、預(yù)防和治療的基礎(chǔ)。本論文分兩章探討:一.初步探討內(nèi)皮素-1基因多態(tài)性與江西漢族人群原發(fā)性高血壓

4、及硝苯地平降壓療效的相關(guān)性。二.探討內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因多態(tài)性與江西漢族人群原發(fā)性高血壓及硝苯地平降壓療效的相關(guān)性
　　方法:
　　第一部分:對(duì)確診為高血壓病的423例患者和114例健康志愿者空腹靜脈抽血分別用于血脂、血糖及ET-1濃度的檢測(cè)及全基因組的提取，并對(duì)所有受試對(duì)象的ET-1基因中rs5370(Lys198Asn)和rs2071942(G8002A)兩個(gè)位點(diǎn)位進(jìn)行基因分型及測(cè)序;同時(shí)，收集受試對(duì)象身高、體重、吸煙

5、等資料。其中281例入選者皆為高血壓初次確診或已停用降壓藥2周以上，抽取靜脈血后，給予口服硝苯地平控釋片30 mg/d，共2周。分別按照收縮壓及舒張壓的降壓效果，選取降壓效果最好及最差的各50例病人，這樣，共156例原發(fā)性高血壓病人成為硝苯地平控釋片降壓療效的研究對(duì)象。分別按收縮壓和舒張壓，對(duì)兩極端組病人基因多態(tài)性與降壓效果進(jìn)行分析。
　　第二部分:對(duì)確診為高血壓病的423例患者和114例健康志愿者空腹靜脈抽血分別用于血脂、血糖及

6、eNOS濃度等檢測(cè)及全基因組的提取，并對(duì)所有受試對(duì)象的eNOS基因中T786C(rs2070744)和G894T(rs1799983)兩個(gè)位點(diǎn)位進(jìn)行基因分型及測(cè)序;同時(shí)，收集受試對(duì)象身高、體重、吸煙等資料。其中281例入選者皆為高血壓初次確診或已停用降壓藥2周以上，抽取靜脈血后，給予口服硝苯地平控釋片30 mg/d，共2周。分別按照收縮壓及舒張壓的降壓效果，選取降壓效果最好及最差的各50例病人，這樣，共156例原發(fā)性高血壓病人成為硝苯地

7、平控釋片降壓療效的研究對(duì)象。分別按收縮壓和舒張壓，對(duì)兩極端組病人基因多態(tài)性與降壓效果進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　第一部分:(1)兩組患者中，除性別及年齡無(wú)差別外，高血壓組患者的血脂、空腹血糖、血壓及體重指數(shù)均明顯高于健康對(duì)照組，兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，此外高血壓組患者吸煙人數(shù)明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.001)。(2)ET-1基因rs2071942和rs5370的多態(tài)性檢測(cè)符合Hardy-Weinberg平衡(p＞

8、0.05)，表明所選取的受試對(duì)象來(lái)自一個(gè)較大的、處于隨機(jī)分配平衡狀態(tài)的群體，具有一定代表性。(3)高血壓患者中，rs5370位點(diǎn)的純合子G/G、T/T及雜合子G/T的基因型頻率分別為73.0％、2.3％及24.7％，T等位基因頻率為14.6％，但與健康對(duì)照組相比，無(wú)論在基因型頻率還是等位基因頻率均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(4)高血壓組rs2071942位點(diǎn)的G等位基因頻率為66.6％，明顯低于健康對(duì)照組的76％，兩組差異明顯，P值為0.007，表

9、明A等位基因的頻率增高可能與高血壓的發(fā)病相關(guān);以G/G與G/A+A/A進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)高血壓組與對(duì)照組之間亦有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001)，表明G/G型純合子的個(gè)體可能能夠抵抗高血壓的發(fā)生(5) ET-1基因rs2071942和rs5370的基因型分布分布均與性別、血壓無(wú)相關(guān)性。(6)無(wú)論以收縮壓還是以舒張壓來(lái)分，ET-1基因rs5370位點(diǎn)多態(tài)性與硝苯地平控釋片降壓效果的關(guān)系，均無(wú)顯著相關(guān)性。(7)在高血壓組及健康對(duì)照組內(nèi)，超重者

10、rs2071942基因型G/G頻率有升高趨勢(shì)，而攜帶A等位基因的基因型有下降趨勢(shì)，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.067和P=0.057)。(8)在高血壓患者中rs5370位點(diǎn)攜帶T等位基因的基因型的吸煙者比例明顯高于G/G純合子患者，提示rs5370位點(diǎn)攜帶T等位基因的吸煙者可能與高血壓有關(guān)。(9)高血壓患者血清ET-1濃度與健康對(duì)照組相比有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)
　　第二部分:(1)除性別及年齡無(wú)差別外，高血壓組患者的血脂

11、、空腹血糖、血壓及體重指數(shù)均明顯高于健康對(duì)照組，兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，此外高血壓組患者吸煙人數(shù)明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.001)。(2) eNOS基因T786C和G894T的多態(tài)性檢測(cè)符合Hardy-Weinberg平衡(p＞0.05)，表明所選取的受試對(duì)象來(lái)自一個(gè)較大的、處于隨機(jī)分配平衡狀態(tài)的群體，具有一定代表性。(3) eNOS基因啟動(dòng)子T786C位點(diǎn)T/T，T/C和C/C基因型在高血壓組分別為22.22％，51.53

12、％，26.47％，在健康對(duì)照組分別為37.72％，53.51％，8.77％，此位點(diǎn)高血壓病組與健康對(duì)照組的基因分布頻率差異有顯著性。(4)eNOS基因第七外顯子第894位點(diǎn)G/G，G/T和T/T基因型在高血壓組分別為69.28％，22.46％，8.26％，在健康對(duì)照組分別為82.46％，14.91％，2.63％，此位點(diǎn)基因分布頻率在高血壓病組與對(duì)照組的差異有顯著性。(5)當(dāng)T786C、G894T兩位點(diǎn)基因型為CC+TT或TC+TT時(shí)，經(jīng)

13、計(jì)算患原發(fā)性高血壓的OR值明顯大于基因型為TT+GG者。(6)高血壓患者血清e(cuò)NOS濃度與健康對(duì)照組相比降低，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但無(wú)論高血壓組還是健康對(duì)照組，組內(nèi)不同eNOS G894T基因型間血漿eNOS濃度比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。(7) eNOS的G894T多態(tài)性與硝苯地平控釋片降壓效果，無(wú)論以收縮壓還是以舒張壓來(lái)分，均無(wú)顯著相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　第一部分
　　(1)高血壓患者ET-1

14、基因rs2071942的A等位基因頻率明顯增高，提示ET-1基因A等位基因也許可以作為江西漢族人群高血壓易感基因的遺傳標(biāo)志;
　　(2) ET-1rs5370多態(tài)性與硝苯地平控釋片降壓療效無(wú)相關(guān)性;
　　(3)高血壓病的高危因素可能會(huì)影響ET-1基因多態(tài)性的改變;
　　(4) rs5370位點(diǎn)攜帶有T等位基因的吸煙者可能更易患高血壓。
　　第二部分
　　(1) eNOS基因啟動(dòng)子T786C及第七外顯子第89

15、4位點(diǎn)基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的發(fā)病有一定程度的相關(guān)性;
　　(2) eNOS基因啟動(dòng)子T786C位點(diǎn)T/T及第七外顯子894位點(diǎn)G/G基因型是原發(fā)性高血壓的保護(hù)性基因;
　　(3) eNOS基因T786C和G894T變異在原發(fā)性高血壓的發(fā)病中可能有一定程度的協(xié)同作用;
　　(4)在江西漢族高血壓人群中，G894T多態(tài)性與血漿eNOS濃度無(wú)顯著相關(guān)性;
　　(5) eNOS G894T多態(tài)性與硝苯地平控釋片降壓療