β-防御素2在急性肝損傷大鼠小腸中表達(dá)及意義.pdf

1、Marshall[1]于1998年正式提出關(guān)于腸-肝軸的概念。肝臟和腸道具有共同的胚胎起源:前腸、腸道淋巴細(xì)胞是從發(fā)育中的肝臟發(fā)育而來(lái)，大量的研究資料顯示肝臟和腸道在解剖學(xué)及生物學(xué)功能上具有密不可分的關(guān)系。在解剖關(guān)系上，門(mén)靜脈是肝臟和腸道聯(lián)系的橋梁，肝臟80％的血液供應(yīng)來(lái)自門(mén)靜脈，門(mén)靜脈有來(lái)自腸道的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、食物抗原、細(xì)菌產(chǎn)物及環(huán)境毒素等。
　　多種原因均可以引起急性肝損傷的發(fā)生，急性肝損傷后將會(huì)發(fā)生一系列的并發(fā)癥，嚴(yán)重的將會(huì)發(fā)生

2、急性肝功能衰竭。當(dāng)肝臟受到損傷時(shí)，肝臟的枯否氏細(xì)胞功能將被受到抑制，一方面腸道內(nèi)的細(xì)菌及內(nèi)毒素會(huì)入侵血液循環(huán)系統(tǒng)導(dǎo)致腸源性的感染;另一方面侵入肝臟的內(nèi)毒素激活枯否氏細(xì)胞，多種炎癥因子被釋放出來(lái)，這些炎癥因子相互作用進(jìn)一步加重腸道粘膜屏障的破壞。
　　防御素存在于腸道上皮細(xì)胞中，起到重要的防護(hù)作用。β-防御素2(β-defensin-2，HBD-2)的研究是熱點(diǎn)問(wèn)題。β-防御素2作為一種可誘導(dǎo)表達(dá)防御素，在皮膚、呼吸道、消化道廣泛分

3、布，它具有抗菌活性廣，在參與機(jī)體先天性免疫及獲得性免疫中具有重要作用。肝損傷腸道中β-防御素2表達(dá)如何？本實(shí)驗(yàn)建立了不同急性肝損傷模型，旨在探討不同急性肝損傷腸道中β-防御素2的表達(dá)。
　　目的:建立不同的肝損傷模型，觀察腸道中β-防御素2表達(dá)。
　　方法:①選擇健康SD大鼠隨機(jī)分為三組，分別為四氯化碳組、2-AAF/PH組及空白對(duì)照組。分別于1d、7d、14d、21d處死動(dòng)物取肝臟組織和小腸組織。②采用hematoxyli

4、n&eosin staining(H&E染色)觀察大鼠肝組織及小腸病理組織學(xué)表現(xiàn)。③Western Blotting檢測(cè)技術(shù)觀察β-防御素2在腸道中蛋白表達(dá)。④RT-PCR技術(shù)檢測(cè)觀察β-防御素2在腸道中基因表達(dá)。
　　結(jié)果:①與空白對(duì)照組相比，2-AAF/PH組第1天時(shí)肝臟顏色為淡紅色，質(zhì)脆，隨時(shí)間推移約21天后肝臟顏色恢復(fù)正常。四氯化碳組與之比較，大鼠肝臟呈暗紅色，質(zhì)脆，約14天后恢復(fù)正常;②肝臟組織H&E結(jié)果顯示，與空白對(duì)照

5、組相比，四氯化碳組、2-AAF/PH組可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹，排列紊亂，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。2-AAF/PH組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯比四氯化碳組多，細(xì)胞腫脹最嚴(yán)重。③腸道組織病理結(jié)果示，2-AAF/PH組腸黏膜損傷較嚴(yán)重，腸黏膜脫落，腸絨毛排列紊亂，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，隨著肝損傷的修復(fù)，腸道損傷恢復(fù)正常;四氯化碳組腸黏膜損傷較2AAF/PH組輕，腸黏膜輕度脫落，有少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，也是隨著肝損傷的修復(fù)，腸道黏膜恢復(fù)到正常。④血清肝功能結(jié)果顯示，大鼠造模成功后第1

6、天空白對(duì)照組肝功能沒(méi)有明顯變化;四氯化碳組、2-AAF/PH組與空白對(duì)照組相比大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotrans ferase，ALT）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）及堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)水平明顯升高（ALT:47.01±9.36 U/L vs41.98±6.65 U/L，P＜0.05;249.1±19.72 U/L

7、vs41.98±6.65 U/L,P＜0.05; AST:133.96±14.36U/L vs82.48±21.87 U/L，P＜0.05;557.97±12.86 U/L vs82.48±21.87U/L,P＜0.05; ALP:270.32±36.08Uvs53.27±8.51U,P＜0.05;520.67±33.01 U vs53.27±8.51U，P＜0.05），白蛋白(albumin，ALB)水平明顯下降（23.36±2.22

8、g/L vs32.14±3.73 g/L，P＜0.05;23.9±1.05 g/L vs32.14±3.73 g/L，P＜0.05）。四氯化碳組和2-AAF/PH組之間比較，2-AAF/PH組肝功能變化較大。⑤β-防御素2變化情況:RT-PCR結(jié)果顯示，空白對(duì)照組1天、7天、14天、21天各時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯差別（1.090±0.0041.092±0.0031.089±0.0021.087±0.002 P＞0.05）;四氯化碳組和2-AAF/

9、PH組β-防御素2 mRNA的量，1天、7天、14天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)與空白對(duì)照組比較，都增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，第21天時(shí)與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差別，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，2-AAF/PH組與四氯化碳組1天、7天、14天比較，都顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，21天與四氯化碳組比較，無(wú)明顯變化，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，在空白對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯變化(P＞0.05);Western Blot結(jié)果與PCR

10、結(jié)果一致，2-AAF/PH組β-防御素-2蛋白水平表達(dá)1天、7天、14天（1.90±0.071.60±0.021.41±0.01）較空白對(duì)照組（1.04±0.031.04±0.031.03±0.01）明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05，第21天時(shí)（1.06±0.06）與空白對(duì)照組（1.04±0.03）比較無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），2-AAF/PH趨勢(shì)為第1-21天呈下降趨勢(shì)，第21天時(shí)和空白對(duì)照組一致;四氯化碳組1天