清脈飲及拆方含藥血清對TNF-α損傷的人血管內(nèi)皮細胞及相關(guān)因子的影響.pdf

1、目的：研究淸脈飲及其拆方的含藥血清對腫瘤壞死因子α（TNF-α）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞（EAhy926）損傷的血管內(nèi)皮細胞及相關(guān)因子的影響。
　　方法：制備實驗設(shè)計的含藥血清；將培養(yǎng)的EAhy926細胞，隨機分為空白對照組、TNF-a損傷組、10％低劑清法組、10%中劑清法組、10%高劑清法組、活血組、全方組、軟堅組等。各中藥含藥血清及清法不同濃度含藥血清與TNF-α共同處理血管內(nèi)皮細胞24h后，光鏡下觀察EAhy926細胞的形態(tài)

2、變化，電鏡下觀察EAhy926細胞的細胞器改變；免疫組化法檢測CRP、IL-6、ET-1及VEGF光學顯微鏡下觀察它們在細胞中它們的表達情況；硝酸還原法檢測NO，通過顯色深淺測定其濃度的高低；Real-time PCR檢測NF-ΚB基因的表達；
　　結(jié)果:①光鏡下細胞大體形態(tài)變化清脈飲含藥血清與TNF-α共同處理的細胞，各組損傷均較少，細胞數(shù)量多，活血組細胞數(shù)量相對較少；②電鏡下細胞結(jié)構(gòu)的改變：清脈飲含藥血清與 TNF-α共同處理

3、的細胞其損害較單純 TNF-α損傷組的細胞小，其中以中劑清法組、軟堅組、西藥組，對細胞器的損傷最少，細胞的超微結(jié)構(gòu)與正常對照組比較沒有明顯差異；③下調(diào)NO濃度，CRP、IL-6、ET-1及VEGF的表達量上，組間比較，10%中清組較其他濃度在下調(diào)內(nèi)皮素具有良好效果最好；下調(diào)NO濃度以及CRP、IL-6、VEGF的表達，西藥組的效果最佳，10%中清組效果優(yōu)于軟堅組、活血組。清法各濃度組之間比較，10%中清組較其他濃度效果最好；④下調(diào)NF-

4、ΚB基因的表達上，組間比較，10%中清組、全方組、西藥組在控制NF-ΚB的表達上具有優(yōu)勢，西藥組的效果最佳，10%中清組、全方組、10%低清組、10%高清組、軟堅組、活血組依次次之。10%中清組與全方組相當且低于活血組（P＜0.05），說明10%中清組效果優(yōu)于活血組。清法各濃度組之間比較，10%中清組較其他濃度在下調(diào)NF-ΚB基因的表達具有效果最好。
　　結(jié)論:①清脈飲及其拆方含藥血清可能通過拮抗TNF-α對體外培養(yǎng)的動脈內(nèi)皮細胞

5、的損傷作用，保持其結(jié)構(gòu)完整性；以起到防止或減輕動脈內(nèi)皮細胞損傷的作用；西藥組、清法方含藥血清效果最佳。②清脈飲及其拆方含藥血清可能通過下調(diào)受損內(nèi)皮細胞內(nèi)NO濃度，CRP、ET-1、IL-6、VEGF的表達量以阻止內(nèi)皮細胞進一步損傷，其中以10%清法組效果較佳，優(yōu)于活血組；③清脈飲及其拆方含藥血清可能通過阻斷TNF-α激活的NF-κB經(jīng)典通路，調(diào)控NF-κB基因表達從而減輕對血管內(nèi)皮的炎癥反應(yīng)。④從實驗的各個角度中觀察，在清脈飲及其拆方中