番茄紅素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　觀察番茄紅素對(duì)腫瘤壞死因子α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)損傷模型，基質(zhì)金屬蛋白酶（metalloproteases，MMP）-9的表達(dá)的抑制作用，進(jìn)一步探討該藥的藥理作用，為該藥的臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)HUVEC，并根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)

2、目的分為5組：
　?。?）空白對(duì)照組（A組）；
　　（2）TNF-α組（B組，加入終濃度為50ng/mL TNF-α作用24h）；
　?。?）番茄紅素低劑量組（B組：HUVEC細(xì)胞經(jīng)1μmol/L番茄紅素預(yù)處理1h后，加入50ng/mL的TNF-α孵育24h）；
　?。?）番茄紅素中劑量組（C組：TNF-α+5μmol/L番茄紅素）；
　　（5）番茄紅素高劑量組（D組：TNF-α+10μmol/L番茄紅素）

3、。
　　孵育結(jié)束后，WST-1法檢測(cè)HUVEC細(xì)胞增殖情況，ELISA檢測(cè)MMP-9產(chǎn)生，明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MMP-9的活性改變情況。分別提取核蛋白和胞漿蛋白，Western blot檢測(cè)（蛋白質(zhì)印跡法） NF-κB p65核轉(zhuǎn)位，以及胞漿磷酸化I-κB的水平改變情況。
　　結(jié)果：
　?。?）0～10μmol/L番茄紅素對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用。當(dāng)其濃度為15μmol/L時(shí)，細(xì)胞活性降低了7％；
　?。?）50ng/m

4、L TNF-α作用24h后，對(duì)HUVEC生長(zhǎng)抑制率為32%，而1，5，10μmol/L番茄紅素預(yù)處理HUVEC后，生長(zhǎng)抑制率分別降至20.4%，14.6%和4.51%；
　?。?）TNF-α誘導(dǎo)HUVEC后，MMP-9濃度為（1.17±0.24）ng/ml，1，5，10μmol/L番茄紅素能以劑量依賴性方式抑制TNF-α誘導(dǎo)的MMP-9產(chǎn)生，并能抑制其活性；
　　（4）正常對(duì)照組細(xì)胞核內(nèi)幾乎未檢測(cè)到NF-κB的活性亞基p65

5、；TNF-α處理24h后，核內(nèi)p65亞基顯著增多。不同濃度番茄紅素處理后，細(xì)胞核內(nèi)p65亞基含量隨著濃度的增高而降低；
　?。?）HUVEC在靜息狀態(tài)下，胞漿內(nèi)I-κB磷酸化水平很低。TNF-α誘導(dǎo)后， I-κB磷酸化水平迅速增高。番茄紅素預(yù)處理能有效抑制I-κB的降解。
　　結(jié)論：
　?。?）番茄紅素能抑制TNF-α誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞表達(dá)MMP-9；
　?。?）番茄紅素抑制MMP-9的產(chǎn)生可能與抑制NF-κB