Arl13B通過調(diào)控Hedgehog信號(hào)通路影響胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的分子機(jī)制.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：356520511003南昌大學(xué)博士研究生學(xué)位論文Arl13B通過調(diào)控通過調(diào)控Hedgehog信號(hào)通路影響胃癌細(xì)胞惡信號(hào)通路影響胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的分子機(jī)制性生物學(xué)行為的分子機(jī)制MolecularmechanismofArl13BonbiologicalacteristicsofgastriccancercellsbyregulatingofHedgehogsignalingpathway邵佳培養(yǎng)單位（院

2、、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：羅時(shí)文教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)論文答辯日期：2015年11月答辯委員會(huì)主席：評(píng)閱人：2015年11月摘要摘要第一部分：第一部分：Arl13B與Smo相互作用相互作用目的：目的：驗(yàn)證Arl13B與Smo的相互作用，確定其結(jié)合位點(diǎn)。方法：方法：利用基因克隆技術(shù)構(gòu)建pcDNA3.0FlagSmopGFPArl13B真核表達(dá)載體及pGEX6P1Arl13B原核表達(dá)載體的全長(zhǎng)

3、及各個(gè)片段，通過免疫共沉淀（coIP）、體外GSTpulldown、免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證其在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的相互作用及確定結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)果：結(jié)果：免疫共沉淀（內(nèi)源性和外源性）實(shí)驗(yàn)均證實(shí)Arl13B與Smo有相互作用，且配體Shh刺激后其結(jié)合能力增強(qiáng)，免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)、GSTpulldown同樣得到陽(yáng)性結(jié)果；確定Arl13B結(jié)構(gòu)中的GTPbindingdomain(1150aa)與Smo的胞內(nèi)C端（550787aa）相互作用。結(jié)論：結(jié)

4、論：Arl13B的GTPbindingdomain(1150aa)與Smo的胞內(nèi)C端(550787aa)相互作用。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：免疫共沉淀，相互作用，Arl13B第二部分：第二部分：Arl13B對(duì)胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響對(duì)胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響目的：目的：研究Arl13B對(duì)胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響。方法：方法：選取相應(yīng)的胃癌細(xì)胞系，分別通過慢病毒技術(shù)構(gòu)建Arl13B穩(wěn)定下調(diào)細(xì)胞系、Arl13B穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞系，經(jīng)Shh刺

5、激前后通過平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響；裸鼠實(shí)驗(yàn)：觀察皮下移植瘤的生長(zhǎng)。通過多西環(huán)素45周的誘導(dǎo)表達(dá)后，處死裸鼠，切取移植瘤，并通過WB及免疫組化檢測(cè)相關(guān)信號(hào)通路指標(biāo)的變化。結(jié)果：結(jié)果：1，干擾Arl13B后，經(jīng)Shh刺激穩(wěn)定細(xì)胞系A(chǔ)GS、SGC7901后增殖、遷移及侵襲力較對(duì)照組明顯減弱。2，過表達(dá)Arl13B后，經(jīng)Shh刺激穩(wěn)定細(xì)胞系MKN28后增殖、遷移及侵襲力較對(duì)