CUL4A通過(guò)調(diào)控Hippo通路促胃癌細(xì)胞增殖和侵襲的分子機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討CUL4A在胃癌中的作用機(jī)制和臨床意義
　　方法：
　　免疫組織化學(xué)檢測(cè)124例胃癌組織中CUL4A的表達(dá)，分析其表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理特征和生存時(shí)間的關(guān)系；觀察過(guò)表達(dá)和干擾CUL4A對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和EMT的影響；裸鼠動(dòng)物模型驗(yàn)證干擾CUL4A對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響；實(shí)時(shí)定量 PCR、免疫熒光和蛋白質(zhì)免疫共沉淀等方法探討 CUL4A失活LATS1-Hippo通路的分子機(jī)制；熒光素酶報(bào)告基因等方法

2、探討miR-9和miR-137對(duì) CUL4A的靶向調(diào)控作用；最后在體外細(xì)胞水平和新鮮胃癌組織中驗(yàn)證miRNAs-CUL4A-LATS1-Hippo調(diào)控軸在胃癌細(xì)胞中的作用和臨床意義。
　　結(jié)果：
　　免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示 CUL4A蛋白表達(dá)水平與胃癌患者 TNM分期（P=0.025）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.003）密切相關(guān)，高表達(dá)CUL4A蛋白預(yù)示胃癌患者預(yù)后不良（P=0.026）。過(guò)表達(dá)CUL4A促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和EM

3、T，干擾CUL4A則抑制胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和EMT。過(guò)表達(dá)CUL4A能降低 LATS1和p-YAP蛋白的表達(dá)，而不影響MST1/2蛋白的表達(dá)，促進(jìn)YAP蛋白入核，干擾CUL4A表達(dá)則相反，并且顯著抑制YAP相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄。免疫共沉淀結(jié)果顯示CUL4A與LATS1蛋白結(jié)合發(fā)揮作用。分別上調(diào)miR-9和miR-137的表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞增殖和侵襲，下調(diào)CUL4A蛋白表達(dá)，而不影響CUL4A mRNA表達(dá)，熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果表明miR-9和

4、miR-137靶向調(diào)控CUL4A的表達(dá)。不僅如此，miR-9和miR-137通過(guò)靶向CUL4A調(diào)控Hippo通路，過(guò)表達(dá)CUL4A能部分逆轉(zhuǎn)miR-9和miR-137抑制胃癌細(xì)胞增殖和侵襲的作用。在胃癌組織中， miR-9和miR-137的表達(dá)水平均與CUL4A和YAP蛋白表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　miR-9/137-CUL4A-LATS1-Hippo調(diào)控軸失衡參與了胃癌細(xì)胞惡性進(jìn)展， CUL4A可作為治療胃癌的一個(gè)