大豆C2結(jié)構(gòu)域蛋白GmCap1的研究.pdf

1、Cap是含有一個C2結(jié)構(gòu)域的小蛋白，能夠提高植物對非生物脅迫的抵抗能力，對促進(jìn)自身的生長發(fā)育具有重要作用。本研究以大豆(Glycine max(L.)Merr)鐵豐8號為材料，克隆得到了一個GmCap1基因，并從不同方面研究了它在響應(yīng)逆境脅迫方面的作用。主要研究結(jié)果如下:
　　1.GmCap1基因的克隆及表達(dá)模式分析
　　利用反轉(zhuǎn)錄PCR從大豆材料中擴(kuò)增得到GmCap1基因。該基因全長543bp，編碼180個氨基酸，包含一個

2、C2結(jié)構(gòu)域。亞細(xì)胞定位結(jié)果表明，GmCap1蛋白定位于細(xì)胞膜中。實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果表明GmCap1基因受鹽、干旱、ABA和BR誘導(dǎo)表達(dá)。
　　2.GmCap1轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型分析
　　為了進(jìn)一步研究GmCap1的功能，構(gòu)建pCAMBIA1302-GmCap1表達(dá)載體，帶有CaMV35S啟動子，轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，利用花序侵染法得到過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因擬南芥。發(fā)芽率實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在MS0培養(yǎng)基中，野生型WT、過表達(dá)株系（GmCap1-

3、2和GmCap1-5）和突變體(mutant)發(fā)芽率基本一致，沒有明顯差異;脅迫處理時，過表達(dá)株系的萌發(fā)明顯要比野生型和突變體早，例如100mM NaCl處理3天時，突變體的萌發(fā)率只有20.8％，野生型發(fā)芽率為54.1％，而兩個過表達(dá)株系的萌發(fā)率分別只有91.7％和75.0％，9％PEG和0.5uM ABA處理時也得到了同樣的結(jié)果，說明在脅迫處理下，與野生型相比，過表達(dá)株系萌發(fā)快，而突變體的萌發(fā)要明顯晚于前兩者。根長實(shí)驗(yàn)也同樣表明，在脅