時間分辨熒光免疫分析測定環(huán)境雌激素的研究.pdf

1、時間分辨熒光免疫分析法是近十年發(fā)展起來的一種微量分析方法,是利用免疫反應的高特異性和標記示蹤物的高度靈敏性相結合而建立的一類非放射性的新興檢測技術。近年來以其具有靈敏度高、示蹤物穩(wěn)定、標準曲線范圍寬、不受樣品自然光干擾、無放射性污染、多標記等優(yōu)點逐漸為人們所重視。由于環(huán)境雌激素對內分泌系統(tǒng)具有較強的干擾作用,可以導致畸形、發(fā)育異常、生殖功能障礙、代謝紊亂、癌癥等。環(huán)境雌激素種類繁多分布廣泛,不僅影響人類健康,也威脅到生物物種的存亡。建立

2、環(huán)境雌激素的分析檢測方法對于研究環(huán)境雌激素類物質的遷徙、轉化、作用機理等方面具有重要的意義,已成為國際上分析化學和環(huán)境化學的熱門話題。
　　本論文在稀土元素標記抗體的制備、免疫分析方法的建立方面展開工作。建立了時間分辨熒光免疫分析測定單組份的方法,同時利用雙標記技術對雙組份進行測定,建立了雙組份同時測定的時間分辨熒光免疫分析方法。這些方法對推動新型環(huán)境監(jiān)測方法的研究及擴大生物技術的應用,具有重要的理論和現(xiàn)實意義。
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3、為以下五部分:
　　一、完全抗原的合成和標記抗體的制備
　　雌二醇、雌三醇、己烯雌酚和雙酚 A分子量較小,它們都是半抗原小分子,小分子本身不能被現(xiàn)有的固相載體吸附,必須與大分子載體偶聯(lián)后,才能通過載體的作用將半抗原包被到固相載體上。本文合成了雌二醇、雌三醇、己烯雌酚和雙酚A的完全抗原,同時利用稀土離子標記了抗體。
　　二、時間分辨熒光免疫分析測定己烯雌酚
　　以二乙烯三胺五乙酸酐(DTPAA)為銪的螯合劑,采用兩

4、步法標記抗己烯雌酚(DES)抗體,建立了競爭型時間分辨熒光免疫分析測定己烯雌酚(DES)的新方法,比普通熒光免疫分析靈敏度提高100倍,在0.001~100 ng/mL之間有良好的線性,其線性回歸方程為ΔI(I0-I)=2855.44lgC+11351.3,相關系數(shù)為0.9933,檢測限為1pg/mL,最低檢出限為0.595pg/mL。將此方法用于血清樣品和水樣的測定,并同時采用異硫氰光素(FITC)標記的羊抗兔抗體為分析試劑的熒光免疫

5、分析方法做了對照試驗,相關性良好,測定結果令人滿意。
　　三、時間分辨熒光免疫分析法測定雙酚A
　　利用完全抗原包被微孔板,以銪標記的抗雙酚A(BPA)抗體為分析試劑,建立了雙酚A的競爭免疫反應分析方法并對抗原濃度、抗體濃度、pH值等條件進行了優(yōu)化。此方法在0.001~1000ng/mL之間有良好的線性,其線性回歸方程為ΔI(I0-I)=897.34lgC+3644.2,相關系數(shù)為0.9892,方法的檢測限為1pg/mL,最

6、低檢出限為0.623pg/mL。將此方法用于食品包裝袋浸取液,塑料瓶裝水和血清加標樣品的測定,采用傳統(tǒng)的熒光免疫分析方法進行了對照試驗,效果良好。
　　四、時間分辨熒光免疫分析同時測定己烯雌酚和雙酚A
　　采用銪和釤兩種稀土元素標記的抗己烯雌酚抗體和抗雙酚抗體作為分析試劑,利用兩種不同的完全抗原同時包被微孔板,建立了競爭法免疫反應模式,利用時間分辨熒光分析技術對己烯雌酚和雙酚A進行了測定,其DES在0.0064ng/mL~5

7、00ng/mL有良好的線性,相關系數(shù)為0.9886,而BPA在0.032ng/mL~500ng/mL,線性相關系數(shù)為0.9928。將此方法用于水樣和血清樣品的測定,結果令人滿意。
　　五、雌二醇和雌三醇同時測定的時間分辨熒光免疫方法
　　以二乙烯三胺五乙酸酐(DTPAA)為雙功能螯合劑,采用兩步標記法標記了抗雌二醇(E2)抗體和抗雌三醇(E3)抗體,建立了競爭法免疫反應模式,利用時間分辨熒光分析技術對雌二醇(E2)和雌三醇(