環(huán)境雌激素的時間分辨熒光免疫分析新方法研究.pdf

1、環(huán)境雌激素是環(huán)境內(nèi)分泌干擾物最重要的一類物質(zhì)。這類物質(zhì)進(jìn)入機體后,通過干擾體內(nèi)正常內(nèi)分泌物質(zhì)的合成、運輸、釋放、結(jié)合、代謝等過程,激活或抑制內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能,從而破壞機體的穩(wěn)定性。環(huán)境雌激素及其危害已成為世界各國關(guān)注的焦點。時間分辨熒光因其靈敏度高、操作簡便、不受樣品的自然熒光干擾等優(yōu)點,在方法學(xué)研究、臨床應(yīng)用和分析化學(xué)中得到了廣泛應(yīng)用。
　　本課題研究的主要內(nèi)容是建立時間分辨熒光免疫分析測定環(huán)境雌激素的新方法。利用生物素-鏈霉親

2、和素的信號放大作用,采用熒光物質(zhì)標(biāo)記在鏈霉親和素上,以具有獨特?zé)晒馓匦缘蔫|系元素及其螯合物為示蹤物,制備一種靈敏度高、穩(wěn)定性好的新型熒光免疫分析試劑,進(jìn)而建立生物素-鏈霉親和素放大的時間分辨熒光免疫分析方法。
　　該研究主要包括以下幾方面:
　　一、生物素-鏈霉親和素放大時間分辨熒光免疫分析法測定己烯雌酚
　　以己烯雌酚完全抗原包被微孔板,板上的完全抗原和樣品中的己烯雌酚競爭結(jié)合己烯雌酚抗體,羊抗兔 IgG-生物素再與

3、抗體結(jié)合,銪標(biāo)記的鏈霉親和素再與羊抗兔IgG-生物素結(jié)合,建立了生物素-鏈霉親和素放大時間分辨熒光免疫分析測定己烯雌酚的新方法。在1.0pg/mL~1.0mg/mL之間呈良好的線性,其線性回歸方程為ΔF=925.4lg(C)+15808.5,相關(guān)系數(shù)為0.9944,檢出限為0.81pg/mL。所建立的方法用于血清中己烯雌酚含量的測定,結(jié)果滿意。
　　二、包被抗體模式時間分辨熒光免疫分析法測定雙酚A
　　采用雙酚A抗體包被微孔

4、板,羊抗兔IgG-生物素與樣品中雙酚A半抗原競爭結(jié)合板上的抗體,銪標(biāo)記的鏈霉親和素再與羊抗兔IgG-生物素結(jié)合,建立了固相抗體模式的生物素-鏈霉親和素放大時間分辨熒光免疫分析測定雙酚A的新方法。在1.0pg/mL~10.0mg/mL之間有良好的線性,其線性回歸方程為ΔF=3231.3lg( C)+18959.8,相關(guān)系數(shù)為0.9948,方法的檢測限為1.0pg/mL,檢出限為0.50pg/mL。將此方法用于食品包裝袋浸取液中雙酚A的測定

5、,結(jié)果滿意。
　　三、基于固相抗體模式時間分辨熒光免疫分析測定雌三醇
　　基于固相抗體競爭反應(yīng)模式,采用雌三醇抗體包被微孔板,銪標(biāo)記的雌三醇完全抗原和樣品中的雌三醇半抗原競爭結(jié)合板上的抗體,建立了包被抗體競爭免疫反應(yīng)模式的時間分辨熒光免疫分析測定雌三醇的新方法,在優(yōu)化的條件下,在5.0 pg/mL~1.0 mg/mL之間有良好的線性,其線性回歸方程為ΔF=4601.1 lg(C)+1455.9,相關(guān)系數(shù)為0.9925,檢出限

6、為4.0 pg/mL。該方法用于檢測血清中雌三醇的含量,結(jié)果令人滿意。
　　四、包被抗原模式時間分辨熒光免疫法測定雙酚A
　　采用正交實驗優(yōu)化免疫反應(yīng)的條件,將時間分辨熒光免疫技術(shù)與正交實驗結(jié)合起來,以雙酚A完全抗原包被微孔板,板上的完全抗原和樣品中的雙酚A競爭結(jié)合雙酚A抗體,羊抗兔IgG-生物素再與雙酚A抗體結(jié)合,以銪標(biāo)記的鏈霉親和素作為標(biāo)記物,建立了包被抗原競爭免疫反應(yīng)模式的時間分辨熒光免疫分析測定雙酚 A的新方法。此方