食管癌高發(fā)區(qū)患者癌組織中Fascin的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、研究背景與目的：
　　全球?qū)θ祟?lèi)威脅最大的六大惡性腫瘤中，食管癌占有一席之地，而我們?nèi)A夏民族正是食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國(guó)度。因?yàn)獒槍?duì)性強(qiáng)、靈敏度高同時(shí)又經(jīng)濟(jì)、便于操作的初期診斷和易患人群篩查指標(biāo)和方法的貧乏，日常生活中絕大多數(shù)食管癌患者有吞咽困難等臨床表現(xiàn)后，才到醫(yī)院就診，此時(shí)90％以上病患已進(jìn)展到癌癥的中、晚期，他們的預(yù)后極不好，5年生存率僅在10%上下。癌癥細(xì)胞的分化水平以及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移程度等被看做是直接關(guān)系食管癌患者預(yù)后

2、的主要原因。癌癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和惡性轉(zhuǎn)移則是致使食管癌癌癥復(fù)發(fā)和患者去世的主要因素。然而常常有腫瘤組織分化水平或TNM分期與患者術(shù)后生存時(shí)間、生存質(zhì)量不一致的現(xiàn)象在臨床上被發(fā)現(xiàn)，即組織分化水平較低的患者預(yù)后并非比分化高的患者差，不同預(yù)后的患者可以屬于同一TNM分期，這就表明簡(jiǎn)單的從形態(tài)學(xué)的改變來(lái)判定患者預(yù)后及生活質(zhì)量，缺乏科學(xué)性和嚴(yán)謹(jǐn)性。很明顯，要想進(jìn)一步提高食管癌患者的生存率，就必須研究這些患者的分子轉(zhuǎn)變特征，找出能準(zhǔn)確預(yù)側(cè)預(yù)后的相關(guān)基因

3、，從而指導(dǎo)食管癌患者術(shù)后的綜合治療。Fascin是一種構(gòu)造奇特的細(xì)胞骨架蛋白，可以促進(jìn)活性細(xì)胞膜突起，并使細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)，研究表明某些腫瘤的預(yù)后與其表達(dá)程度有相關(guān)性。以往研究報(bào)導(dǎo)食管癌病患癌細(xì)胞的分裂增殖和侵襲轉(zhuǎn)移有Fascin的高表達(dá)參與，病患的生存期短、預(yù)后差也與其緊密相關(guān)。在關(guān)于我國(guó)食管癌高發(fā)區(qū)之一的河南、河北和山西三省交界處患者癌組織中 Fascin表達(dá)的研究，目前報(bào)道較少。本研究實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化方法研究在368例食管癌高發(fā)區(qū)

4、患者癌組織中的 Fascin蛋白的表達(dá)，分析臨床表型與其表達(dá)之間的相互關(guān)系，用以了解其臨床意義，從而為食管癌患者指導(dǎo)臨床治療。
　　材料與方法:
　　1、研究對(duì)象
　　食管癌標(biāo)本：為368例經(jīng)病理確診為食管鱗癌的手術(shù)標(biāo)本，均由2000-2008年河南省食管癌高發(fā)地區(qū)醫(yī)院提供。其中男性243例(平均年齡為62±8歲，年齡范圍為38-78歲)，女性125例(平均年齡為65±7歲，年齡范圍為41-71歲)，全部患者均是在沒(méi)有

5、進(jìn)行任何放療和化療的前提下進(jìn)行手術(shù)。
　　2、組織處理
　　用85%的乙醇對(duì)食管癌標(biāo)本進(jìn)行固定，按日常脫水處理后，用白石蠟將其包埋，持續(xù)切片3張，規(guī)格為4μm，一張用無(wú)水乙醇固定后做HE染色，進(jìn)行組織病理診斷，核實(shí)組織病理學(xué)診斷，一張做免疫組化染色，一張備用。
　　3、免疫組織化學(xué)
　　免疫組化采用蛋白素-生物素-辣根過(guò)氧化氫酶復(fù)合物即 Avidin-Biotin-Peroxidase Complex Metho

6、d, ABC法，測(cè)試癌細(xì)胞中Fascin蛋白的表達(dá)水平。一抗為Monoclonal mouse anti-human Fascin，1:100稀釋?zhuān)庖叩鞍钻?yáng)性著色大部分分布在細(xì)胞漿，是棕黃色。定性：根據(jù)免疫陽(yáng)性細(xì)胞染色程度(A)設(shè)定：沒(méi)有染色的為0分；核膜及胞漿內(nèi)存在淡黃色小粒，顯著高于背景者設(shè)定為1分；存在大量棕黃色小粒者設(shè)定為2分；有大量深棕黃色顆粒者為3分。定量：每個(gè)免疫組化切片高倍鏡下(×40)計(jì)量最少5個(gè)隨機(jī)視野，收集免疫表

7、達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(B)的平均值，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例＜5％、5％～25％、25％～50％、50％～75％、＞75％者依次標(biāo)記0分、1分、2分、3分、4分。定性和定量綜合評(píng)定：A×B0-4分者為陰性(－)，5～8分者為弱陽(yáng)性(+)，9~12分者為強(qiáng)陽(yáng)性(++)。
　　4、隨訪
　　對(duì)所有研究病例進(jìn)行術(shù)后跟蹤隨訪，隨訪截止時(shí)間為2014年12月。全部得到完整隨訪資料（包括：性別、年齡、病理診斷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分型、浸潤(rùn)程度、分化程度、T

8、NM分期、腫瘤部位、手術(shù)時(shí)間、隨訪時(shí)間、健康狀況等）。其中死亡150例，死因均為腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　選用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間對(duì)比選用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性選取Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)，生存分析選用Kaplan-Meier分析。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)取α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1、臨床病理資料結(jié)果
　　368例食管癌組織均經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)為食管鱗癌，其中年齡小于等于60歲者231例(63%

9、，231/368)，大于60歲者136例(37%，135/368)；癌組織高、中、低分化程度分別為37例(10%，37/368)、236例(64%，236/368)、95例(26%，95/368)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)、陰性者分別為138例(38%，138/368)、230例(62%，230/368)；腫瘤部位上、中、下段分別為59例（16%，59/368）、250例（68%，250/368）、59例（16%，59/368）；浸潤(rùn)程度分別為：粘

10、膜及粘膜下層47例（13%，47/368）、肌層72例（20%，72/368）、纖維膜249例（67%，249/368）；腫瘤類(lèi)型：潰瘍型111例（30%，111/368）、髓質(zhì)型164例（45%，164/368）、縮窄型36例（10%，36/368）、蕈傘型57例（15%，57/368）；臨床分期：早、中、晚期分別為39例（11%，11/368）、310例（84%,310/368），19例（5%，19/368）。
　　2、免疫組

11、化結(jié)果
　　1）在368例數(shù)的ESCC組織中Fascin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為68%(249/368)。
　　2）男、女性食管癌組織中 Fascin陽(yáng)性表達(dá)率分別為67%(162/243)，70%(87/125)(P>0.05)。
　　3）小于等于60歲、大于60歲兩個(gè)年齡組Fascin的陽(yáng)性表達(dá)率分別為68%(157/231)和67%(91/136)(P>0.05)。
　　4）各浸潤(rùn)程度中Fascin的陽(yáng)性表達(dá)率在

12、粘膜及粘膜下層為72%（35/47），肌層為60%（41/72），纖維膜為70%（173/249）(P>0.05)。
　　5）從高→中→低分化的ESCC標(biāo)本中Fascin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率呈逐步降低趨勢(shì)，分別為78%(29/37)、70%(166/236)和57%(54/95)，F(xiàn)ascin的陽(yáng)性表達(dá)率與分化程度之間有相關(guān)性(RR=0.143，P=0.02)。
　　6）淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)、陰性組癌標(biāo)本中Fascin的陽(yáng)性表達(dá)率依次為

13、64%(88/38)和70%(161/230)(P>0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)、陰性的患者術(shù)中取淋巴結(jié)的平均數(shù)分別為8和6，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率與所取淋巴結(jié)的數(shù)目成正相關(guān)，這可能是導(dǎo)致Fascin的陽(yáng)性表達(dá)率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)、陰性組中無(wú)差異的原因。
　　7）上、中、下段食管癌患者標(biāo)本中Fascin的陽(yáng)性表達(dá)率依次是64%（38/59）、68%（170/250）和69%（41/59）(P>0.05)。
　　8）不同臨床分型中Fasc

14、in的陽(yáng)性表達(dá)率潰瘍型為64%（71/111）、髓質(zhì)型為67%（110/164）、縮窄型為72%（21/36）、蕈傘型為77%（44/57）(P>0.05)。
　　9）早、中、晚不同臨床分期中Fascin的陽(yáng)性表達(dá)率分別為79%(31/39)、66%(206/310)和63%(12/19)(P>0.05)。
　　3、生存資料Kaplan-Meier分析結(jié)果
　　368例食管癌組織中Fascin蛋白表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性和陰

15、性組所占比例分別為28%（103/368）、40%（146/368）和32%（119/368），經(jīng)過(guò)Kaplan-Meier生存分析患者的生存期與Fascin的表達(dá)強(qiáng)度有相關(guān)性(P=0.023)。
　　結(jié)論:
　　1）食管癌組織中Fascin的陽(yáng)性表達(dá)率隨失分化程度加重而呈明顯下降趨勢(shì)，提示Fascin表達(dá)可能是判斷食管癌預(yù)后的分子標(biāo)志物。
　　2）食管癌患者術(shù)后10年隨訪發(fā)現(xiàn)：食管癌組織中 Fascin高表達(dá)的食管癌