miRNA-200家族在胃癌患者血清中的表達(dá)和臨床意義研究.pdf

1、目的：采用RT-PCR檢測(cè)胃癌患者血清、健康人群血清，胃癌患者腫瘤切除前血清、切除后血清中miR-200家族（包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429五個(gè)子族）的表達(dá)水平。
　　1、了解miR-200家族（miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429）在健康人群和胃癌患者人群血清中表達(dá)的差異性；
　　2、了解miR-200家族各成員在胃癌

2、患者術(shù)前和胃癌患者人群術(shù)后血清中表達(dá)的差異性；
　　3、在miR-200家族五個(gè)成員中篩選出目標(biāo)靶基因（此miRNA在健康人群和胃癌患者人群血清、胃癌患者術(shù)前和術(shù)后血清中均有差異表達(dá)），進(jìn)行下一步的較大樣本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證；
　　4、根據(jù)健康人群和胃癌患者血清中目標(biāo)miRNA的檢測(cè)結(jié)果，探討其診斷胃癌的敏感性和特異性，并與傳統(tǒng)胃癌血清標(biāo)志物CEA、CA-199、CA-724進(jìn)行對(duì)比；根據(jù)胃癌患者術(shù)前和術(shù)后血清中目標(biāo)miRNA的檢測(cè)結(jié)

3、果，探討其評(píng)估手術(shù)治療效果的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：收集蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院32例胃癌患者和31例健康志愿者的血液標(biāo)本，提取其RNA。臨床資料通過回顧分析其就診病歷獲得。
　　1、篩選：采用RT-PCR檢測(cè)11例健康志愿者和12例胃癌患者血清、12例胃癌患者術(shù)前和術(shù)后血清中miR-200家族（miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429）的表達(dá)量，探討各成員表達(dá)的差異性，篩選出在健

4、康人群和胃癌患者人群血清、胃癌患者術(shù)前和術(shù)后血清中均有差異表達(dá)的miRNA；
　　2、驗(yàn)證：將篩選出的目標(biāo)miRNA進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。另提取20例健康人群和20例胃癌患者術(shù)前術(shù)后血清，檢測(cè)目標(biāo)miRNA的表達(dá)水平，并結(jié)合前期11例健康人群/12例胃癌患者血清中目標(biāo)miRNA的表達(dá)量，最終完成31例健康人群和32例胃癌患者術(shù)前術(shù)后血清目標(biāo)miRNA表達(dá)水平的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)；
　　3、臨床意義研究：①利用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析目標(biāo)mi

5、RNA在胃癌血清中表達(dá)的差異性；②利用卡方檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)分析目標(biāo)miR-200家族成員的表達(dá)量與其年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等臨床病理特征的關(guān)系；③利用受試者工作特征曲線（ROC）及曲線下面積(Area Under Curve,AUC)判斷血清中目標(biāo)miRNA水平對(duì)胃癌患者的診斷價(jià)值，并與腫瘤標(biāo)志物CEA、CA-199、CA-724進(jìn)行比較；④利用配對(duì)t檢驗(yàn)分析胃癌患者術(shù)前和術(shù)后目標(biāo)miRNA表達(dá)差異性，評(píng)估其手術(shù)治

6、療效果的潛在臨床價(jià)值。
　　結(jié)果：1、前期的篩選結(jié)果顯示，miRNA-200家族5個(gè)成員中，miR-200b和miR-200c在健康人群和胃癌患者血清中是差異表達(dá)的（均P<0.05），且miR-200c的表達(dá)水平相對(duì)miR-200b更低，miR-200a、miR-141、miR-429水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）。同時(shí)，胃癌患者血清miR-200c在術(shù)前和術(shù)后的表達(dá)水平具有差異性（P<0.05），miR-200a、miR

7、-200b、miR-141、miR-429水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）。將miR-200c（在健康人群和胃癌患者人群血清、胃癌患者術(shù)前和術(shù)后血清中均有差異表達(dá)）作為目標(biāo)靶基因進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證分析；
　　2、驗(yàn)證結(jié)果顯示，相對(duì)健康人群，胃癌患者血清miR-200c表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），且胃癌患者術(shù)后miR-200c表達(dá)水平顯著高于術(shù)前（P<0.05）。驗(yàn)證結(jié)果與前期篩選結(jié)果一致。Logistic回歸分析顯示，血清

8、miR-200c水平是胃癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，和胃癌的發(fā)生呈負(fù)性相關(guān)；
　　3、與31例正常對(duì)照人群相比,miR-200c的表達(dá)在早期(I/II期)胃癌患者血清中就發(fā)生了下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。miR-200c異常表達(dá)與臨床分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目相關(guān)，分期越晚、淋巴轉(zhuǎn)移數(shù)越多，血清miR-200c表達(dá)量越低（均P<0.05）。而胃癌患者的血清miR-200c與其性別、年齡、浸潤深度、分化程度以及腫瘤位置等無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

9、義(均P>0.05)；
　　4、血清miR-200c的曲線下面積（0.775）大于CEA(0.646)、CA-199(0.649)和CA-724(0.660)；血清miR-200c對(duì)胃癌的診斷與CEA、CA-199和CA-724相比,敏感性分別為78.1％、34.4%、31.3%、40.6%（均P<0.05）。血清miR-200c對(duì)胃癌的診斷價(jià)值顯著高于CEA、CA-199和CA-724。
　　結(jié)論：1、miR-200c在胃