納米材料作為Long PCR增效劑的研究.pdf

1、近十幾年來，國內(nèi)外的Long PCR技術(shù)一直沒有較大的突破。但是隨著納米技術(shù)的不斷發(fā)展，它與生物學(xué)的聯(lián)系也越來越緊密，這也為Long PCR技術(shù)的發(fā)展提供了一個嶄新的視角。由于納米材料具有表面效應(yīng)和量子尺寸效應(yīng)等特性，它可以影響一些諸如蛋白質(zhì)、核酸分子等生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能，所以越來越多的科學(xué)家選擇使用納米材料作為Long PCR的增效劑，以解決Long PCR擴增困難的問題。
　　本文首先選擇了10Xbuffer體系建立了Lo

2、ng PCR實驗?zāi)Ｐ停瑢?6種碳納米材料和9種金屬納米材料進行了篩選。然后利用ABC buffer（實驗室自主研發(fā)試劑盒）和3種細(xì)胞核內(nèi)小分子（肌苷（Inosine）、異亮氨酸（Isoleucine）、尿苷（Uridine））及其最適濃度的組合對4種常規(guī)的Long PCR buffer進行了優(yōu)化，對優(yōu)化的結(jié)果進行進一步的檢測，同時建立了第二次篩選納米材料的Long PCR模型，并對76種碳納米材料和9種金屬納米材料進行了第二次篩選，并對

3、其結(jié)果進行了驗證。最后使用實時定量PCR對全部的納米材料進行了檢測。
　　結(jié)果表明在10Xbuffer和Barnes9.1ABD體系下，除納米銀外，8種金屬納米材料都有促進PCR反應(yīng)的作用，其最適濃度為1mg/ml、10mg/ml。而系列碳納米材料只有在Barnes9.1ABD體系下，才有增效作用，它們是10mg/ml的7號、18號、23號、39號碳納米材料。
　　ABC buffer對Tricine buffer和Bici

4、ne buffer體系有明顯的優(yōu)化作用，而3種核內(nèi)小分子以及其組合中，肌苷（Inosine）、異亮氨酸（Isoleucine）、尿苷（Uridine）3種小分子最適濃度的組合（簡稱ABD）對Barnes9.1有明顯的增效作用，經(jīng)過進一步的驗證還發(fā)現(xiàn)，Barnes9.1ABD體系在目的片斷為20kb以上的擴增中效果也很好，最長可以擴增出30kb的目的產(chǎn)物。
　　經(jīng)實時定量PCR的檢測發(fā)現(xiàn)，10mg/ml和1mg/ml的碳納米材料對熒

5、光有嚴(yán)重的淬滅作用，而金屬納米材料對熒光幾乎沒有淬滅作用。不同濃度的不同種類的納米材料對目的片斷的Tm值有不同的影響。濃度為1mg/ml的47號碳納米材料，0.1mg/ml的1、2、8、25、27、28、30、33、47、48、49、55、61、66號碳納米材料以及10mg/ml的cl-Ag可以降低Ct值，即可以提高擴增效率。
　　本課題篩選出了有增效作用的4種碳納米材料和8種金屬納米材料，這為后期納米材料增效作用的進一步研究提供