抗真菌藥增效劑的篩選及利福噴丁的抗真菌增效作用研究.pdf

1、目的：
　　近年來，隨著大量抗菌藥物和抗腫瘤藥物的廣泛使用、器官移植和介入技術(shù)的發(fā)展以及獲得性免疫缺陷綜合癥發(fā)病率的逐年上升，致使真菌感染逐漸增多。以念珠菌感染為例，全球每年約有7280萬的念珠菌條件致病患者，導(dǎo)致死亡率高達(dá)33.9％。目前，白念珠菌已超過大腸桿菌，成為院內(nèi)感染的主要致病菌之一。
　　深部真菌感染患者的逐漸增多，勢必造成臨床上抗真菌藥的廣泛應(yīng)用，接踵而至的則是大量的真菌耐藥。以白念珠菌為例，30％的白念珠菌臨

2、床分離株表現(xiàn)出原發(fā)性唑類耐藥，且在治療過程中這種耐藥率還會不斷上升。國內(nèi)調(diào)查結(jié)果顯示：在傳統(tǒng)抗真菌藥中，白念珠菌對伊曲康唑的耐藥率最高。而國外研究結(jié)果也表明：念珠菌屬真菌對米卡芬凈、阿尼芬凈等新型抗真菌藥的耐藥率也在逐年上升。
　　研發(fā)新的藥物無疑需要高昂的成本和漫長的周期，而新藥投入使用后迅速產(chǎn)生的藥物耐藥又往往讓高昂的研發(fā)成本得不償失。于是，我們借鑒增效劑在農(nóng)業(yè)、及抗細(xì)菌方面應(yīng)用的成功經(jīng)驗(yàn)，嘗試從已有常用藥物中篩選出一些對經(jīng)典

3、抗真菌藥具有增效作用的藥物，以期為耐藥真菌病的治療提供一條更為經(jīng)濟(jì)、有效的解決方案。
　　方法：
　　第一部分：我們采用目測法觀察了5類（包括免疫抑制劑、羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑、抗抑郁藥、抗生素、非甾體類抗炎藥）28種非抗真菌藥在一定濃度下單用及與低濃度氟康唑（1/4MIC80）合用后對白念珠菌氟康唑耐藥菌株100、白念珠菌氟康唑耐藥菌株103、白念珠菌氟康唑敏感菌株SC5314、白念珠菌氟康唑敏感菌株Y0109及C

4、RK1基因敲除菌株CRK1Δ的抑菌效果。具體：將配制好的統(tǒng)一濃度的藥物原液單獨(dú)及與低濃度氟康唑（1/4MIC80）聯(lián)合后加入96孔板的菌懸液中，35℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)（敏感菌、基因敲除菌）及48小時(shí)（耐藥菌）后拿出，肉眼觀察各孔真菌生長情況。菌液澄清為陽性，菌液渾濁則為陰性。重復(fù)該實(shí)驗(yàn)3次，若3次皆為陽性，計(jì)為“+”，若3次中有陰性結(jié)果，計(jì)為“-”。
　　第二部分：根據(jù)CLSI推薦的M27-A2方案，采用棋盤式微量液基稀釋法對第一

5、部分篩選出的14種藥物與氟康唑合用后對白念珠菌耐藥菌株100、103的聯(lián)合作用效果進(jìn)行評價(jià)。根據(jù)兩藥合用后的FICI值判定二者的聯(lián)合效應(yīng)：FICI≤0.5時(shí)，確定為增效作用，且FICI值越小，藥物的增效作用越強(qiáng)；0.5＜FICI≤4時(shí)為無關(guān)作用；FICI>4時(shí)為拮抗作用。
　　第三部分：采用棋盤法對利福噴丁對伊曲康唑等其它5種常用抗真菌藥的體外增效作用進(jìn)行判定，繼而采用同樣的方法判定利福噴丁對兩性霉素B體外抗多株耐藥白念珠菌臨床分

6、離株生長的增效作用，并同時(shí)應(yīng)用二者單用及在不同濃度下時(shí)合用時(shí)白念珠菌耐藥菌株100在YEPD、RPMI1640兩種培養(yǎng)基中的生長曲線驗(yàn)證了利福噴丁對兩性霉素B的增效作用。
　　結(jié)果：
　　第一部分：在所有受試28種藥物中：他克莫司、舍曲林等藥物在適宜濃度下單用即可抑制受試白念珠菌的生長，與氟康唑聯(lián)合后抑菌作用更為顯著；利福噴丁、辛伐他汀等藥物雖然在一定濃度單用只能抑制敏感菌株及CRK1基因敲除菌株的生長，但與低濃度氟康唑聯(lián)合

7、后也可抑制耐藥白念珠菌的生長。即上述藥物可能在抑制白念珠菌生長方面對氟康唑具有增效作用。
　　第二部分：在篩選出的14種藥物中，以他克莫司（FK506）及環(huán)孢素A（CyA）對氟康唑的體外抗白念珠菌生長增效作用最為顯著，其次為利福噴丁。阿奇霉素、甲硝唑等藥物與氟康唑聯(lián)合后對白念珠菌耐藥菌株只表現(xiàn)有無關(guān)作用。所有備選藥物與氟康唑聯(lián)合后無一表現(xiàn)為拮抗作用。
　　第三部分：在所有與抗真菌藥的組合中，利福噴丁對兩性霉素B的體外抗白念珠

8、菌增效作用最為顯著，其次為對咪康唑和伊曲康唑的增效作用。利福噴丁對特比萘芬和酮康唑的體外增效作用相對較弱，但也表現(xiàn)了不同程度的增效作用。耐藥白念珠菌100在利福噴丁及兩性霉素B各自單用及合用時(shí)在YEPD、RPMI1640兩種培養(yǎng)基中的生長曲線實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了利福噴丁對兩性霉素B的體外抗真菌增效作用。
　　結(jié)論：
　　在所有入選5類28種藥物中，他克莫司（FK506）、環(huán)孢素A（CyA）對氟康唑的體外抗白念珠菌增效作用最強(qiáng)，其