TSPO在腦出血后的表達及其配體依替福辛腦保護作用的初步研究.pdf

1、腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)，為卒中的一種亞型，其發(fā)病率高，占所有卒中的第二位，每年全球約有兩百萬例腦出血發(fā)生。腦出血發(fā)病急驟，病情變化快且兇險，具有相當高的致殘、致死率，極大威脅人類的健康。目前仍缺乏有效的治療干預措施。腦出血的損傷機制除了形成占位效應的血腫所帶來原發(fā)性損傷，更包括如血液降解產物毒性、炎癥、水腫等后續(xù)繼發(fā)性損傷。近年有關實驗研究表明，神經炎癥反應在ICH后腦損傷進展過程中為一個重要

2、的部分。炎癥反應在腦出血后迅速發(fā)生，發(fā)生發(fā)展機制涉及到原位小膠質細胞的激活、外周白細胞滲透侵入，伴隨多種炎癥介質大量的產生，加重了腦損傷。由于參與的細胞及細胞因子眾多，它們之間相互作用、調節(jié)，又有各自的作用，存在錯綜復雜的關系。因此研究ICH后神經炎癥反應相關損傷及尋找安全有效的治療措施顯得十分重要。
　　轉運蛋白18k Da(Translocator Protein18 kDa，TSPO)，曾也叫外周型苯二氮卓類受體（Perip

3、heral Benzodiazepine Receptor，PBR）。TSPO廣泛分布于全身多處組織，在正常狀態(tài)下的腦組織中，TSPO主要表達在膠質細胞中，并且含量較低。當處于缺血缺氧、炎癥、神經毒性等病理狀態(tài)時，TSPO伴隨著膠質細胞的激活，敏感又迅速地表達上調。并且已在多種中樞神經系統(tǒng)疾病觀察到這一現(xiàn)象，所以，TSPO被看作是神經炎癥反應的一個標志物。因此，將TSPO配體用放射性元素標記后作為示蹤劑，通過PET成像，從而作為一種能夠

4、深入探索、活體并實時研究神經炎癥反應在中樞神經系統(tǒng)疾病過程及評價治療效果的新手段。從目前現(xiàn)有的研究來看，TSPO及其配體已表現(xiàn)出在臨床上運用的良好前景。但目前TSPO的表達及其配體的運用在腦出血中領域尚無相關實驗研究有報道。此外，TSPO參與多種細胞生理功能，其中最主要為參與膽固醇等脂類物質的轉運，作為限速步驟，調控并促進神經類固醇的合成。TSPO的部分內源性及外源性配體，在離體或在體實驗中已證實能夠促進神經類固醇增多，并能減輕神經炎癥

5、反應，作為潛在的治療手段。依替福辛(Etifoxine，EFX)，作為TSPO配體中的一種，是一種臨床上使用的抗焦慮藥物。依替福辛在多發(fā)性硬化動物模型中，表現(xiàn)出抑制外周免疫細胞入侵、降低炎癥產物水平、促進膠質細胞再生的作用，并改善了神經運動功能障礙。但目前確切的作用機制尚未闡明。
　　本實驗建立了小鼠實驗性腦出血動物模型，第一部分將初步研究腦出血后轉運蛋白TSPO的表達情況及與炎癥反應的關系，以為將來腦出血后活體成像、神經炎癥反應

6、的在體監(jiān)測打下基礎，第二部分研究TSPO的外源性配體依替福辛在腦出血后可能發(fā)揮的抑制炎癥反應的神經保護作用，并為腦出血綜合治療提供新的方法。
　　目的:通過建立小鼠實驗性腦出血動物模型，檢測腦出血后血腫周圍組織中TSPO的表達情況及部位，了解TSPO與腦出血后神經炎癥反應的關系。
　　方法:實驗總共分為三部分。第一部分建立自體血注入法小鼠實驗性腦出血模型，將實驗動物分為假手術組、15μl出血量組、25μl出血量組，于術后1d

7、進行神經功能評分及磁共振掃描。第二部分將留取上述各組小鼠腦組織，并留取25ul出血量組小鼠在術后12h，1d，3d，5d的腦組織，用于Western Blot檢測TSPO的表達。第三部分將25ul出血量組小鼠腦組織在術后12h,1d,3d,5d用于免疫熒光組化檢測TSPO在小膠質細胞、星形膠質細胞上的表達。
　　結果:1.磁共振結果成功建立小鼠實驗性腦出血模型，在術后1d時，25μl出血組小鼠的神經功能障礙明顯重于15μl出血組小

8、鼠。
　　2.Western Blot結果表明，15μl出血量組及25μl出血量組TSPO表達較Sham組明顯升高,25μl出血量組的TSPO表達多于15μl出血量組;25μl出血量組在術后12h時，TSPO表達增多不明顯，但在術后1d、3d、5d逐漸增加。
　　3.免疫熒光結果表明，TSPO的表達在術后明顯增加，主要表達在激活的小膠質細胞和星形膠質細胞上。
　　結論:TSPO在小鼠腦出血后的表達有明顯增多，表達量與術