TSPO在腦出血后的表達(dá)及其配體依替福辛腦保護(hù)作用的初步研究.pdf

1、腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)，為卒中的一種亞型，其發(fā)病率高，占所有卒中的第二位，每年全球約有兩百萬(wàn)例腦出血發(fā)生。腦出血發(fā)病急驟，病情變化快且兇險(xiǎn)，具有相當(dāng)高的致殘、致死率，極大威脅人類的健康。目前仍缺乏有效的治療干預(yù)措施。腦出血的損傷機(jī)制除了形成占位效應(yīng)的血腫所帶來(lái)原發(fā)性損傷，更包括如血液降解產(chǎn)物毒性、炎癥、水腫等后續(xù)繼發(fā)性損傷。近年有關(guān)實(shí)驗(yàn)研究表明，神經(jīng)炎癥反應(yīng)在ICH后腦損傷進(jìn)展過程中為一個(gè)重要

2、的部分。炎癥反應(yīng)在腦出血后迅速發(fā)生，發(fā)生發(fā)展機(jī)制涉及到原位小膠質(zhì)細(xì)胞的激活、外周白細(xì)胞滲透侵入，伴隨多種炎癥介質(zhì)大量的產(chǎn)生，加重了腦損傷。由于參與的細(xì)胞及細(xì)胞因子眾多，它們之間相互作用、調(diào)節(jié)，又有各自的作用，存在錯(cuò)綜復(fù)雜的關(guān)系。因此研究ICH后神經(jīng)炎癥反應(yīng)相關(guān)損傷及尋找安全有效的治療措施顯得十分重要。
　　轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白18k Da(Translocator Protein18 kDa，TSPO)，曾也叫外周型苯二氮卓類受體（Perip

3、heral Benzodiazepine Receptor，PBR）。TSPO廣泛分布于全身多處組織，在正常狀態(tài)下的腦組織中，TSPO主要表達(dá)在膠質(zhì)細(xì)胞中，并且含量較低。當(dāng)處于缺血缺氧、炎癥、神經(jīng)毒性等病理狀態(tài)時(shí)，TSPO伴隨著膠質(zhì)細(xì)胞的激活，敏感又迅速地表達(dá)上調(diào)。并且已在多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病觀察到這一現(xiàn)象，所以，TSPO被看作是神經(jīng)炎癥反應(yīng)的一個(gè)標(biāo)志物。因此，將TSPO配體用放射性元素標(biāo)記后作為示蹤劑，通過PET成像，從而作為一種能夠

4、深入探索、活體并實(shí)時(shí)研究神經(jīng)炎癥反應(yīng)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病過程及評(píng)價(jià)治療效果的新手段。從目前現(xiàn)有的研究來(lái)看，TSPO及其配體已表現(xiàn)出在臨床上運(yùn)用的良好前景。但目前TSPO的表達(dá)及其配體的運(yùn)用在腦出血中領(lǐng)域尚無(wú)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究有報(bào)道。此外，TSPO參與多種細(xì)胞生理功能，其中最主要為參與膽固醇等脂類物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，作為限速步驟，調(diào)控并促進(jìn)神經(jīng)類固醇的合成。TSPO的部分內(nèi)源性及外源性配體，在離體或在體實(shí)驗(yàn)中已證實(shí)能夠促進(jìn)神經(jīng)類固醇增多，并能減輕神經(jīng)炎癥

5、反應(yīng)，作為潛在的治療手段。依替福辛(Etifoxine，EFX)，作為TSPO配體中的一種，是一種臨床上使用的抗焦慮藥物。依替福辛在多發(fā)性硬化動(dòng)物模型中，表現(xiàn)出抑制外周免疫細(xì)胞入侵、降低炎癥產(chǎn)物水平、促進(jìn)膠質(zhì)細(xì)胞再生的作用，并改善了神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能障礙。但目前確切的作用機(jī)制尚未闡明。
　　本實(shí)驗(yàn)建立了小鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血?jiǎng)游锬Ｐ?，第一部分將初步研究腦出血后轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TSPO的表達(dá)情況及與炎癥反應(yīng)的關(guān)系，以為將來(lái)腦出血后活體成像、神經(jīng)炎癥反應(yīng)

6、的在體監(jiān)測(cè)打下基礎(chǔ)，第二部分研究TSPO的外源性配體依替福辛在腦出血后可能發(fā)揮的抑制炎癥反應(yīng)的神經(jīng)保護(hù)作用，并為腦出血綜合治療提供新的方法。
　　目的:通過建立小鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血?jiǎng)游锬Ｐ?，檢測(cè)腦出血后血腫周圍組織中TSPO的表達(dá)情況及部位，了解TSPO與腦出血后神經(jīng)炎癥反應(yīng)的關(guān)系。
　　方法:實(shí)驗(yàn)總共分為三部分。第一部分建立自體血注入法小鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血模型，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為假手術(shù)組、15μl出血量組、25μl出血量組，于術(shù)后1d

7、進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分及磁共振掃描。第二部分將留取上述各組小鼠腦組織，并留取25ul出血量組小鼠在術(shù)后12h，1d，3d，5d的腦組織，用于Western Blot檢測(cè)TSPO的表達(dá)。第三部分將25ul出血量組小鼠腦組織在術(shù)后12h,1d,3d,5d用于免疫熒光組化檢測(cè)TSPO在小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞上的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.磁共振結(jié)果成功建立小鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血模型，在術(shù)后1d時(shí)，25μl出血組小鼠的神經(jīng)功能障礙明顯重于15μl出血組小

8、鼠。
　　2.Western Blot結(jié)果表明，15μl出血量組及25μl出血量組TSPO表達(dá)較Sham組明顯升高,25μl出血量組的TSPO表達(dá)多于15μl出血量組;25μl出血量組在術(shù)后12h時(shí)，TSPO表達(dá)增多不明顯，但在術(shù)后1d、3d、5d逐漸增加。
　　3.免疫熒光結(jié)果表明，TSPO的表達(dá)在術(shù)后明顯增加，主要表達(dá)在激活的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞上。
　　結(jié)論:TSPO在小鼠腦出血后的表達(dá)有明顯增多，表達(dá)量與術(shù)